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目的糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病常见的微血管并发症,现已成为导致终末期肾病(end-stage renal disease, ESRD)的首位原因,其发生发展与肾小球血流动力学的改变、糖基化终末产物的生成、多元醇代谢通路的异常等因素有关。近年来,越来越多的研究发现DN的发生可能与免疫机制变化引起的慢性炎症反应有关。本研究以高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)尾静脉注射构建的2型糖尿病和糖尿病肾病大鼠动物模型为研究对象,以雷公藤多苷为治疗药物,探讨雷公藤多苷对大鼠血中1型辅助性T淋巴细胞(Th1)/2型辅助性T淋巴细胞(Th2)细胞比例及其所分泌的γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)在血中和肾脏中表达的影响及可能的作用机制。方法清洁级雄性SD大鼠136只,在无特定病原体级(SPF级)条件下饲养,随机选取16只作为预防正常对照组(PNC)、治疗正常对照组(TNC),每组8只,饲以常规饲料；其余120只始终饲以高糖高脂饲料,4周后以尾静脉注射STZ诱导成T2DM模型。将造模成功的大鼠随机分为预防模型组(PDM)、预防雷公藤多苷干预低剂量组(PTL,6mg/kg·d)、预防雷公藤多苷干预中剂量组(PTM,12mg/kg·d)、预防雷公藤多苷干预高剂量组(PTH,24mg/kg·d)治疗模型组(TDM)、治疗雷公藤多苷干预低剂量组(TTL,6mg/kg·d)、台疗雷公藤多苷干预中剂量组(TTM,12mg/kg·d)、治疗雷公藤多苷干预高剂量组(TTH,24mg/kg·d),每组15只。PNC组及雷公藤多苷预防组(PDM、PTL、PTM、PTH组),于成模后开始灌胃,第4周末处死取材；TNC组及雷公藤多苷治疗组(TDM、 TTL、TTM、TTH组),则于成模后的第5周开始灌胃治疗,第8周末处死取材。PNC、TNC组及PDM、TDM组均以等量的蒸馏水灌胃。观察大鼠成模前后血糖、体重、灌胃前后24h尿微量白蛋白(Urine microalbumin, UMA)、给药后肝肾功能、血常规、血脂等的变化；并于第4、8周末处死动物后,通过流式细胞术(Flow cytometry, FCM)观察大鼠外周血CD4+T细胞中Thl/Th2细胞比例变化、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测大鼠血清中IFN-γTNF-α、IL-4、IL-10水平的变化以及通过RT-PCR和Western blotting方法分别从基因水平和蛋白水平观察4种细胞因子在肾脏的表达情况。结果1)高糖高脂饲料喂养组大鼠在高糖高脂饲料喂养4周后的基础血糖明显高于PNC、TNC组(P<0.05)。STZ注射后高糖高脂饲料喂养组大鼠出现多饮、多食、多尿表现,血糖均较造模前明显升高(P<0.05)、体重较造模前明显降低(P<0.05)、尿微量白蛋白水平自成模后第4周起明显高于PNC、TNC组(P<0.05)。2)与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠UMA、肾重/体重(KW/BW)明显升高(P<0.05)；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防和治疗组中的三个给药组UMA、KW/BW有不同程度下降,其中PTM、TTM组下降最明显(P<0.05), PTH组降低不明显(P>0.05)。3)一般指标：雷公藤多苷预防组和治疗组谷丙转氨酶(ALT)、血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)、血常规与PNC、TNC组相比无差异(P>0.05); PTH组大鼠谷草转氨酶(AST)水平明显升高(P<0.05)；雷公藤多苷治疗组中三个给药组大鼠血中淋巴细胞数(LYM)较TNC组明显降低(P<0.05),但三组间无差异(P>0.05)。高糖高脂饲料喂养组大鼠在高糖高脂饲料喂养4周后的基础TG、TC明显高于PNC、TNC组(P<0.05)；成模后PDM、TDM组TG、TC亦均较PNC、TNC组进一步升高(P<0.05),各给药组TG、TC又较PDM、TDM且有不同程度降低(P<0.05),其中PTM、TTM组下降最明显。4)流式细胞术：与PNC、TNC组相比,PDM、 TDM组大鼠外周血中Thl细胞比例、Th1/Th2匕值明显升高(P<0.05),Th2细胞比例有不同程度降低；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防和治疗组中的三个给药组上述指标均有不同程度的降低,其中PTM、TTM组Thl细胞比例、Thl/Th2比值下降最明显(P<0.05)。5) ELISA方法：与PNC, TNC组相比,PDM、TDM组大鼠血清IFN-γ、 TNF-a水平明显升高(P<0.05), IL-4、IL-10水平有不同程度降低；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防和治疗组中的三个给药组上述细胞因子均有不同程度的降低,其中PTM、TTM组IFN-γ、TNF-α下降最明显(P<0.05), PTH组TNF-α降低不明显(P>0.05)。6) RT-PCR方法：与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠肾脏中IFN-γ、 TNF-α mRNA表达水平明显升高(P<0.05), IL-10mRNA表达水平明显降低(P<0.05), IL-4mRNA表达水平降低不明显(P>0.05)；与PDM、 TDM组相比,雷公藤多苷预防和治疗组中的三个给药组IFN-γ、TNF-α mRNA表达水平有不同程度降低,IL-4、IL-10mRNA表达水平有不同程度的升高,其中PTH组TNF-a mRNA表达水平降低不明显(P>0.05), IL-4、IL-10升高不明显(P>0.05)。7) Western Blotting方法：与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠肾脏中IFN-γ、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P<0.05),IL-10蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-4蛋白表达水平降低不明显(P>0.05)；与PDM、TDM组相比,雷公藤多苷预防和治疗组中的三个给药组IFN-γ、 TNF-α蛋白表达水平有不同程度降低,IL-4、IL-10蛋白表达水平有不同程度的升高,其中PTH组TNF-α蛋白表达水平降低不明显(P>0.05),IL-4、IL-10升高不明显(P>0.05)。结论1)成功制备T2DM和DN动物模型,大鼠24h尿蛋白特点符合人类2型糖尿病肾病的特征。2)高糖高脂饲料喂养组大鼠24h尿微量白蛋白水平、肾重指数自成模后第4周开始逐渐升高；应用低、中剂量雷公藤多苷可以不同程度的降低大鼠尿微量白蛋白水平延缓和治疗2型糖尿病肾病的发生和发展,并且具有较高的安全性；高剂量雷公藤多苷可能会引起肝肾毒性,因此应严格掌握适应症和禁忌症。3) T2DM大鼠体内存在Thl细胞比例上调及其所分泌的促炎细胞因子增多,以及Th2细胞比例下调及其所分泌的抗炎细胞因子减少介导的迟发型免疫炎症反应可能导致了DN的发生和发展。4)不同剂量雷公藤多苷可能通过调节血中Th1/Th2细胞比例和其细胞因子的水平以及改善血脂降低大鼠尿蛋白水平；在肾脏中,雷公藤多苷可能通过抑制促炎细胞因子的产生,增加抗炎细胞因子的表达,减轻肾脏局部的炎症反应,改善DN。