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实验目的:研究大鼠腮腺在不同的导管结扎时间点再通后的再生能力,探讨水通道蛋白 5(Aquaporin 5 AQP5)和细胞程序性死亡分子 5(Programmed cell death 5,PDCD5)在腮腺再生过程中的作用。实验方法:8周大的SPF级雌性Wistar大鼠作为实验动物(体重(250±10g)),将84只大鼠随机实验组和对照组,实验组分为三组(每组27只),分别于结扎后第7天(A组)、14天(B组)、21天(C组)再通,根据导管再通后的取材观察时间各组又分为0、1、3、5、7、10、14、21、28天组(分别表示为A0、A1......A28,B0、B1......B28,C0、C1......C28)。对照组 3 只大鼠行腮腺区手术,分离腮腺主导管,未行结扎手术。取材后,一部分新鲜标本液氮冻存作免疫蛋白印记(Western Blot)蛋白水平、实时荧光定量PCR(real time PCR)基因水平检测AQP5和PDCD5在再生的腮腺组织中的表达变化;另一部分作甲醛固定,制作石蜡切片,作苏木素-伊红染色(HE染色)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS染色)、免疫组化染色,观察组织学形态的变化。实验结果:腮腺主导管再通后三组都出现腺体再生现象,A组和B组分别在再通14天和21天时组织形态和分泌功能基本恢复正常,C组至再通第28天时组织形态及腺体分泌功能未恢复至正常水平。HE染色和AB-PAS染色结果示大鼠腮腺主导管再通后,腺泡细胞呈增多趋势,连接逐渐紧密,导管样结构逐渐恢复至正常导管样形态,腺小叶的形态逐渐恢复,分泌唾液的能力逐渐增强,腺泡及导管内分泌的唾液增多,A组、B组腺体的形态结构和分泌功能可恢复至与正常组无差别,C组腺体结构和细胞分泌能力在再通至28天时明显与正常组有差别。AQP5、PDCD5免疫组化、Western Blot、real time PCR结果示:A组和B组的腮腺再通后AQP5蛋白和基因的表达量逐渐恢复,可分别在A14组和B21组时恢复至正常水平,而结扎21天组,在再通28天后仍未能完全恢复。PDCD5在腺体再通后随导管的凋亡出现增高趋势,三组分别在再通后第5天、第10天、第14天达到最高水平,A组、B组腮腺组织可再生至正常水平,时间分别为再通第14天和再通第21天,C组由于损伤较严重,至再通第28天时未能恢复至正常水平。结论:腮腺主导管阻塞引起的腮腺组织的萎缩在一定时间内具有再生至正常水平的能力,腮腺主导管结扎时间越久,腮腺的损伤程度越严重,其再生能力越差;AQP5的表达是腮腺组织功能恢复的重要指标;PDCD5是细胞凋亡的检测指标,腺体再生过程中导管样结构发生凋亡。