【摘 要】
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TRAIL作为TNF家族成员,最显著的特征是只选择性的对肿瘤细胞具有凋亡诱导作用,而对正常的组织和细胞不具有明显的毒性效应,体内实验也表明,TRAIL能够明显抑制肿瘤细胞生长,甚
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TRAIL作为TNF家族成员,最显著的特征是只选择性的对肿瘤细胞具有凋亡诱导作用,而对正常的组织和细胞不具有明显的毒性效应,体内实验也表明,TRAIL能够明显抑制肿瘤细胞生长,甚至使肿瘤消退,却对宿主细胞没有损害。本室邱松波博士构建了携带人TRAIL基因的重组腺病毒ZD55-hTRAIL,该重组病毒中E1B55KD基因突变,仅能够在p53阴性的细胞中复制。体内、体外实验结果表明,ZD55-hTRAIL单独或联合化疗药物5-FU杀伤肿瘤的效果优于经典的溶瘤病毒ONYX015。为了进一步提高携带TRAIL基因的重组腺病毒治疗肿瘤的效果及其分子机理,本论文研究了腺病毒早期基因(E1A、E1B19KD、E3)与TRAIL诱导调亡之间的相互关系。这些研究将为设计更加合理有效的肿瘤治疗载体提供理论依据,同时也初步揭示了腺病毒感染与宿主细胞之间的分子机制。 首先,我们运用一种新的细菌内同源重组的方法构建了3株非复制型重组腺病毒,Ad-CMV、Ad-E1A和Ad-TRAIL。在这3株重组腺病毒基因组中,E1、E3区完全缺失,插入了带有GFP报告基因的表达盒。外源基因TRAIL和E1A分别插入在重组病毒基因组CMV启动子下的多克隆位点中。经过E.coli BJ5183内同源重组和293细胞中的病毒包装,得到重组病毒,以应用下面的研究中。 虽然TRAIL能有效的诱导肿瘤细胞凋亡而不诱导正常细胞凋亡,但有些肿瘤细胞系或同一肿瘤细胞系中的部分细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡具有抗性。以往的研究显示,腺病毒早期基因E1A能够调控许多病毒和宿主细胞基因的转录表达。因此,我们探讨了E1A是否能够通过某种机制增强肿瘤细胞或正常细胞对
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