论文部分内容阅读
运用表型标记和RAPD标记对福建境内9个光皮桦（Betula luminifera H. Winkl.）天然群体共135个个体样本进行遗传多样性和遗传结构分析，初步揭示了研究群体的遗传多样性现状及其分布格局，同时对两种标记方法进行了比较分析，旨在为光皮桦种质资源的保护、遗传改良以及永续利用提供依据。本研究的主要内容和结果如下： 1．对9个光皮桦天然群体135个单株的7个叶片性状、3个果序性状及5个种子性状等15项形态指标进行表型多样性分析，探讨群体间和群体内的表型变异程度与规律。结果表明，光皮桦种内表型性状在群体间和群体内存在丰富的遗传变异：光皮桦叶、果序和种子3类表型性状的变异系数分别为0.1779、0.1056和0.1930。其中果序性状稳定性高于叶性状和种子性状；群体间平均表型分化系数（Vst）为0.3503，群体间的变异（35.03％）小于群体内的变异（64.97％）；群体内表型变异系数由火到小的排序为：WP（0.1288）＞YA（0.1264）＞LC（0.1153）＞YX（0.1126）＞SW（0.1078）＞WY（0.0966）＞MX（0.0953）＞SX（0.0755）＞SL（0.0509）。光皮桦表型性状间及其与地理气候因子相关分析表明，光皮桦表型性状间存在显著或极显著相关关系，种内群体的叶、果序、种子性状变异也存在较明显的地理变异趋势。聚类分析将9个光皮桦天然群体划分为3类：SX、MX、LC、YA和WP五个群体聚为一类，SW、WY和YX三个群体聚为一类，SL群体独立为一类。 2．通过比较实验，建立了光皮桦基因组DNA的简便提取方法和叶片保存方法；通过参数优化，筛选出一套适合于光皮桦RAPD反应的扩增程序和扩增体系。 （1） 为从富含次生代谢物的光皮桦嫩叶中获得高质簧的DNA，实验设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ、CTAB法Ⅲ、CTAB法Ⅳ和改良的SDS法，应用于光皮桦基因组DNA的提取，并采用琼脂糖凝胶电泳、A260／A280比值测定、限制性内切酶消化和PCR扩增等对所提取的DNA进行比较分析。结果表明：用改良的CTAB法Ⅰ提取的DNA完全可满足RAPD分析的要求。 （2） 以光皮桦新鲜嫩叶为对照，比较了-20℃冷藏、硅胶干燥、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液固定4种鲜叶保存方法对光皮桦基因组DNA提取效果的影响，并以提取的核酸得率、纯度、片段分布情况、是否含有PCR反应抑制剂等指标来评价其保存效果。结果表明：-20℃冷藏的样品未能提到DNA；鲜叶、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液保存的叶片均能提到纯度较蚶的DNA，大小在48kb左右，得率约为400μg·g-1鲜叶，并获得条带清晰、多态性好的PCR扩增图谱；用硅胶干燥保存的叶片也能提到DNA，但得率低(51.2μg·g-1鲜叶)，且未获得条带完整、清晰的PCR扩增图谱。