糖尿病大血管病变是糖尿病患者致残、致死的主要原因之一，与非糖尿病患者相比，糖尿病患者发生大血管病变的几率更高，病变的严重程度更大，发生的时间更早。据WHO估计，在未来的10年里，全世界糖尿病的发病率还将增加一倍，因此了解糖尿病血管损害的机制，寻找相应的防治和干预措施，是目前亟需解决的问题。 血管内皮细胞凋亡是糖尿病血管病变的始发事件，在糖尿病血管病变的发生、发展中具有重要作用，它不仅可以引起血管结构的破坏，还可使内皮功能发生一系列改变。一氧化氮(NO)与内皮细胞凋亡关系密切。C肽作为一种刚刚被认识的肽类激素，已被证实在糖尿病中具有调节糖代谢、改善糖尿病患者肾脏、视网膜及神经功能的作用，而C肽在糖尿病大血管病变中的作用环节和机制尚不清楚。近来的研究发现：内皮型一氧化氮合酶(eNOS)介导了C肽的某些作用，而eNOS正是血管内皮细胞产生NO的主要限速因素。C肽是否能通过eNOS-NO途径对糖尿病血管病变产生影响，目前国内外还未见相关报导。本文对C肽在高糖(HG)、高胰岛素(HI)致大血管内皮细胞凋亡中的作用及其机制进行了初步探讨。 本研究首先建立了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养的实验方法，在此基础上，用细胞DNA片段ELISA法定量测定细胞凋亡，用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法观察内皮细胞eNOS基因、凋亡相关基因bcl-x和bax的表达变化，并进 天津医科大学博士研究生学位论文 行相关分析。 结果显示如下： 1．培养的细胞经相差显微镜观察及Vlll因子染色证实是内皮细 胞闲C人 台盼蓝染色显示95％以上EC存活良好； 2．低浓度的C肽使e＊＊S的表达明显减弱o＜0刀1人 中浓 度和高浓度的C肽使e＊OS的表达明显增强o＜0刀1人 3．生理浓度的 C肽（LC）可使 HG诱导的 EC凋亡明显减 少o叼刀5人并使＜＊OS表达明显增强01刀5入 高胰岛素（m） 和高C肽mC ）也可使＊G诱导的细胞凋亡明显减少 0功刀5人 ＜＊os表达明显增强（P＜0刀5人C肽的浓度降低后，细胞凋亡明 显增多（P＜0．05），同时eNOS表达明显减弱（P＜0．05）； 4．生理浓度的胰岛素（LI）与LC合用，能使HG诱导的细 胞凋亡明显减少（P＜0刀引，＜＊os的表达明显增强 0＜0刀5人 但与LI单独使用相比，细胞凋亡和 eNOS的表达皆无明显差异 0＞0刀5人 在i和＊C的合用中也得到同样的结果； 5．细胞凋亡和e＊OS表达呈负相关（，刁石52，P＜O刀1＼ 6．H附LC与HG相比，bclXL的表达明显增强（P＜0＊引，bax 的表达明显减弱（P＜O．05人HGmHC和HG相比，bd．几的表达 明显增强呼刃刀5Lbax的表达明显减弱呼功刀5人C肽的浓度 降低后，bCI－xL的表达明显减弱 0＜0刀引，bC的表达明显增强 （P＜0．05），bClxL与eNOS呈明显正相关（＊0．882尸＜0＊1）。 上述结果提示： 1．本研究建立的HUVEC体外培养方法简单易行，获得细胞 的数目、活性和纯度符合实验要求，是研究血管内皮绍胞的理想 2 天津医科大学博士研究主学位论文 方法； 2．HU’VEC可以对C肽的刺激产生反应，说明它是C肽作用 的靶细胞，因而可用于C肽的研究中； 3（肽可以引起EC凋亡与eNOS表达的改变上C凋亡与eNOS 表达呈负相关，推测：C肽对EC凋亡的作用可能是由eNOS介导 的； 4．胰岛素和 C肽在抑制EC凋亡上没有明显的协同效应，提 示它们可能通过同一途径发挥作用； 5．2型糖尿病患者血浆C肽浓度的降低，以至于不足以抵消 高血糖对血管内皮的损伤，这可能是导致糖尿病患者发生大血管 病变的原因之一； 6．C肽对EC凋亡的作用是通过调节比．xL和 bax的表达实 现的，而eNOS可能介导了bclXL的表达。 本研究证实了C肽对高糖、高胰岛素致内皮细胞凋亡中的作 用，为研究糖尿病大血管病变的发病机制提供了新的研究方向， 同时也为C肽在临床的应用提供了理论依据。