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目的成釉细胞瘤(Ameloblastama,AM)是口腔颌面部最常见的牙源性肿瘤。近年来随着高通量测序技术的飞速发展,AM致病候选基因的神秘面纱缓缓揭开。本实验选取成釉细胞瘤患者手术或病灶活检获得的肿瘤组织,提取DNA,对鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)基因的15号外显子进行聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增,利用直接测序的方法分析扩增的BRAF基因对应的基因序列,同时与人类基因组库的基因进行对比,找出BRAF基因的突变点。本研究探索BRAF基因突变在AM中的突变率,并分析BRAF突变与AM患者年龄﹑性别﹑发病部位和病理类型之间的统计学关系,为临床上实现个性化治疗AM提供新思路。同时采用免疫组织化学的方法,观察BRAF突变对AM中不同细胞角蛋白(CK5﹑CK14﹑CK19﹑CK-Pan﹑CK34βE12﹑CK18﹑CK20﹑CK8&18和CK 10&13)﹑波形蛋白(Vimentin)和上皮抗原(EA)的表达的影响,并进行定性和半定量分析。方法1收集155例经病理诊断为成釉细胞瘤患者的手术或病灶活检获得的肿瘤组织,整理患者的临床病理资料包括年龄﹑性别﹑发病部位和病理类型等。2提取样本组织中的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)技术和基因直接测序的方法检测155例成釉细胞瘤组织中BRAF基因的突变情况。3采用免疫组化Envision二步法检测15例伴BRAF突变AM和5例无BRAF突变AM的石蜡标本中细胞角蛋白(CK5﹑CK14﹑CK19﹑CK-Pan﹑CK34βE12﹑CK18﹑CK20﹑CK8&18和CK10&13)﹑上皮抗原(EA)和波形蛋白的表达情况。结果1在155例AM样本中,共有150例发生BRAF基因突变,突变检出率为96.8%(150/155),均为15号外显子上V600E突变型(c.1799T>A)。BRAF基因突变与患者的年龄、性别、病理类型无关,而BRAF基因突变更易发生在下颌骨。2在15例BRAF突变和5例无BRAF突变的AM中,CK-Pan﹑CK5﹑CK14﹑CK34βE12和CK19在全部或大部分的肿瘤上皮中呈阳性的表达,二组之间无显著差异(P>0.05)。CK18﹑CK20﹑CK8&18和Vimentin在两组AM的肿瘤上皮均为阴性或少数阳性表达,二组之间无显著差异(P>0.05)。CK10&13在15例BRAF突变组中阳性表达率为53%,而无突变组为40%,亦无显著差异(P>0.05)。EA阳性表达主要位于中央部位的星网层细胞,在BRAF突变组中阳性表达率为7%,显著低于无BRAF突变组(80%)(P<0.05)。结论1在155例AM中的150例检测到BRAFV600E,突变率高达96.8%。提示在中国人群中,BRAFV600E突变可能成为成釉细胞瘤发病的最关键事件,为成釉细胞瘤的靶向治疗寻找新靶点提供了实验数据。2 BRAF突变对AM中CK-Pan﹑CK5﹑CK14﹑CK34βE12﹑CK19﹑CK18﹑CK20﹑CK8&18﹑CK10&13和Vimintin的表达无明显影响,而BRAF突变会显著降低EA在肿瘤上皮中的表达水平,BRAF突变可能会引起AM细胞的免疫表型改变。