论文部分内容阅读
背景和目的MDSCs是一群免疫抑制性细胞,在肿瘤的发生发展中起到重要的免疫抑制作用。胃癌的发病率逐渐上升,有文献报道其与MDSCs有着一定联系。本文拟探究胃癌患者外周血中MDSCs亚群表达水平及MDSCs亚群与胃癌患者总生存期(OS)的关系,同时探究表柔比星、紫杉醇对小鼠骨髓MDSCs比例、功能的影响及相关机制。方法1、收集郑州大学第二附属医院2014年8月至2016年7月肿瘤科、普外科初次诊断为胃癌的患者21例(男15例,女6例;平均年龄59±13岁)。用EDTA管收集化疗前、后清晨空腹外周血2 mL。随机选取郑州大学第二附属医院体健中心体健者10例为对照组。分析MDSCs亚群和胃癌生存期的关系。2、表柔比星和紫杉醇对小鼠骨髓MDSCs的影响(1)钝性分离小鼠两侧大腿骨,收集骨髓细胞。采用免疫磁珠试剂盒分离小鼠骨髓MDSCs后用表柔比星(0、0.5、1、2μg/mL)、紫杉醇(0、0.1、1 nM)处理24 h。(2)流式细胞术检测胃癌患者(接受含表柔比星、紫杉醇方案)第1周期化疗前后外周血及小鼠骨髓(表柔比星、紫杉醇处理前后)MDSCs亚群的比例。(3)ELISA法检测表柔比星、紫杉醇处理后的小鼠骨髓MDSCs释放的Arg-1,iNOS,ROS的量。(4)流式细胞术检测表柔比星、紫杉醇对小鼠骨髓MDSCs细胞周期分布与凋亡的影响。(5)Western blot检测表柔比星(0、0.5、1、2μg/mL)、紫杉醇(0、0.1、1 nM)对MDSCs中p-MAPK(ERK1/2),t-MAPK(ERK1/2),p-NF-κB和tNF-κB蛋白表达的影响。3、数据统计分析:用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理,计量资料正态分布的数据以均数±标准差表示;化疗前后比较用配对样本t检验;用pearson检验进行相关分析;不同浓度药物组之间用ANOVA分析;ROC曲线选取胃癌患者外周血MDSCs的临界值,并通过Kaplan-Meier法进行生存分析;结果用平均值±标准差表示,P<0.05为差异有统计学意义;P<0.05,认为差异有统计学意义。结果1、胃癌患者外周血中MDSCs比例升高(25.29±19.38%vs 6.15±2.07%,P<0.01),且G-MDSCs比例高于M-MDSCs比例(P<0.01),接受含有表柔比星、紫杉醇方案化疗1个周期后MDSCs亚群比例下降(P<0.01)。2、G-MDSCs、M-MDSCs高表达与胃癌患者肿瘤低分化相关,M-MDSCs高表达与淋巴结转移相关(P<0.05);M-MDSCs高表达与胃癌患者总生存期呈负相关(P<0.05)。3、在体外,表柔比星、紫杉醇使小鼠骨髓MDSCs亚群比例下降(P<0.01),表柔比星促进MDSCs凋亡并使其在G2/M期比例增加(P<0.01),紫杉醇诱导小鼠骨髓MDSCs凋亡(P<0.01)。4、在体外,表柔比星能降低MDSC产生的Arg-1、iNOS(P<0.05)。紫杉醇使Arg-1生成减少(P<0.05),ROS均未发现明显异常。5、在体外,表柔比星、紫杉醇使小鼠骨髓MDSCs分泌的Arg-1减少(P<0.05)并抑制MDSCs中t-MAPK(ERK1/2)、p-MAPK(ERK1/2)及t-NF-κB、pNF-κB蛋白表达(P<0.05)。结论1、胃癌患者外周血MDSCs比例升高,表柔比星、紫杉醇可以减少胃癌患者外周血MDSCs比例;G-MDSCs、M-MDSCs高表达与胃癌患者肿瘤低分化有关,M-MDSCs高表达与淋巴结转移相关,M-MDSCs比例与总体生存期呈负相关。2、表柔比星、紫杉醇表柔比星、紫杉醇能通过抑制MDSCs的Arg-1、iNOS释放量,抑制MDSCs的免疫抑制功能,并通过MAPK(ERK1/2)和NF-κB信号通路抑制小鼠骨髓MDSCs增殖,诱导MDSCs的凋亡。