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目的本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达,抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此,本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。方法扩增含CXCR4-shRNA质粒及空质粒载体,利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞,本实验分为3组,干扰组(转染CXCR4-shRNA的SW626细胞)、空载体组(转染空载体的SW626细胞)及空白对照组(不给予任何处理的细胞),转染48小时后,于倒置荧光显微镜下观察转染效率;利用酶标仪结合JC-1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化,采用实时定量RT-PCR法检测ASK1mRNA的表达情况。细胞免疫化学和/或Western Blot检测Caspase-3、EGFR、ERK1/2、p-C-Jun、Akt、TNF-α、NFκBp65、IκB-α蛋白的表达水平。结果1.转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率:当细胞处于对数生长期,状态良好,细胞汇合度达90%左右,按脂质体与质粒之比为1:1的比例进行转染,转染效率达到最高,人卵巢癌细胞SW626细胞的转染效率可达80%左右。2. JC-1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比,线粒体膜电位普遍降低(P<0.001),差异有统计学意义(P<0.05),而空白组与转染空载体组相比(P=0.234),差异无统计学意义。3.运用Real time RT-PCR检测,干扰组与空载体组及空白对照组相比,ASK1mRNA的表达明显增多(P<0.001),差异有统计学意义。4.采用细胞免疫化学及Western blot蛋白印迹法,转染48小时后,干扰组与空载体组及空白对照组比较,CXCR4-shRNA干扰组细胞中EGFR蛋白及其下游信号分子ERK1/2、Akt、NFκBp65、TNF-α蛋白的表达较空白组及转染空载体组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),干扰组中Caspase-3、p-C-Jun、IκB-α蛋白的表达显著提高(P<0.05),差异有统计学意义。结论CXCR4-shRNA促进细胞凋亡的分子机制可能是通过介导EGFR调控其下游信号因子,进而抑制肿瘤细胞生长。该分子机制的研究为今后卵巢癌的基因治疗提供分子生物学依据。