角膜移植排斥反应中细胞凋亡的实验研究

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背景:近来研究表明,器官移植急性期的排斥反应过程伴有移植细胞的凋亡,而在诱导发生免疫耐受的移植物上存在着T淋巴细胞的凋亡.因此,对凋亡进行调控,即阻止实质细胞的凋亡或诱导浸润T细胞的凋亡,将有可能成为特异而有效的防治移植排斥反应的方法. 目的:该研究试图了解角膜移植排斥急性期角膜实质细胞及浸润T淋巴细胞凋亡的动态变化规律,同时检测抗凋亡基因bc1-2的表达,了解其对移植物上的浸润T淋巴细胞存活与凋亡的影响,以期为通过凋亡途径调控移植排斥反应提供进一步研究的线索.方法:制作异体和自体大鼠穿透性角膜移植模型(SD→Wistar,Wistar→Wistar).当排斥指数≥6时被视为发生排斥反应.分别于术后第3天,5天,7天,9天,第12天,第16天,第24天每组取完整术眼角膜4只.从中间分开,一半角膜用于病理切片,TUNEL染色原位显示凋亡细胞,免疫组化检测bc1-2蛋白质的表达部位.对排斥的角膜行CD<,3>和TUNEL双染以观察T淋巴细胞的凋亡.另一半行RT-PCR检测bc1-2 mRNA的表达,并作半定量分析.结论:在角膜移植的急性排斥反应过程中,角膜各层细胞凋亡都显著增加.角膜细胞凋亡的高峰出现在排斥早期而不是排斥反应的高峰.急性排斥反应期间未发现淋巴细胞的显著凋亡.淋巴细胞可能通过表达抗凋亡基因bcl-2而避免了凋亡.
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