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目的研究山核桃外果皮提取物的抗肿瘤作用,筛选其抗肿瘤活性成分,并进一步研究活性成分的体外抗肿瘤机制。为促进山核桃外果皮的深加工及资源开发利用,挖掘其内在药用价值提供实验依据。方法1.采用MTT法,考察萃取部位对SGC7901人类胃癌细胞、HepG2人类肝癌细胞、SW620人类结肠癌细胞的体外增殖抑制作用,并筛选出有效部位。2.采用MTT法与酶联免疫法,考察分离后的单体药物对SGC7901、HepG2、SW620癌细胞的增殖抑制作用及v-Src蛋白表达的影响,并筛选出活性单体。3.采用细胞免疫组化法,考察筛选出的活性单体化合物对SGC7901、HepG2、SW620细胞Src蛋白下游信号ERK1/2的p38MAPK蛋白表达水平的调控作用。4.采用酶联免疫法,考察筛选出的活性单体化合物对SGC7901、HepG2、SW620癌细胞中MMP-2、MMP-9表达的干预作用。结果1.山核桃外果皮不同萃取部位对肿瘤细胞有不同程度的增殖抑制作用,其中石油醚部位的效果最为显著,对HepG2、SGC7901和SW620细胞的IC50分别为123.82μg/mL、2839μg/mL 和 59.54μg/mL。其中对 SGC7901 的 IC50 值约为阳性药的一半。2.球松素、5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮、大黄素单体对HepG2细胞增殖抑制效果依次增强,5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮、大黄素提取部位IC50分别为63.52μg/mL、46.66μg/mL,增殖抑制作用明显强于石油醚萃取部位;各单体成分皆能不同程度抑制SGC7901细胞增殖,IC50值由小到大为大黄素、球松素、5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮、β-谷甾醇、胡桃醌、豆甾醇,增殖抑制效果不如石油醚萃取部位;5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮、大黄素单体对SW620细胞IC50值分别为40.95μg/mL、7.71μg/mL,增殖抑制作用明显强于石油醚萃取部位。3.大黄素、5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮抑制HepG2、SGC7901、SW620细胞中v-Src蛋白表达随着给药浓度增加抑制作用明显增强。大黄素各剂量组作用于HepG2、SW620细胞和SGC7901高、中剂量组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮作用于HepG2细胞各剂量组,SW620、SGC7901细胞高、中剂量组差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。球松素对SW620、SGC7901细胞只有在高剂量组及HepG2细胞高、中剂量组时才对v-Src蛋白表达产生抑制作用(P<0.05)。4.免疫细胞化学法检测大黄素对p38MAPK蛋白的表达影响,结果显示与溶剂对照组相比,大黄素处理组p38MAPK蛋白在三种肿瘤细胞中的表达均明显降低,棕黄色颗粒减少,颜色变浅。5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮处理后的HepG2、SW620细胞中p38MAPK蛋白颜色变浅,而SGC7901细胞中的p38MAPK蛋白无明显变化。5.大黄素对三种肿瘤细胞中MMP-2的表达都有影响,与对照组相比能降低MMP-2的蛋白含量(P<0.05),大黄素低剂量组对SW620中MMP-2蛋白表达的抑制已接近50%,HepG2高剂量组与SW620高、中剂量组有极显著性(P<0.01)。与对照组比,5-羟基-7,4-二甲氧基黄酮的SGC7901与SW620高剂量处理组的MMP-2蛋白表达量均显著降低(P<0.05),对HepG2细胞的实验处理组则无影响。6.与对照组比,大黄素处理组的MMP-9蛋白表达量均显著降低(P<0.05);5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮处理组与对照组相比,除了 HepG2高剂量组能显著降低MMP-9的表达外(P<0.05)其他实验组均无明显差异。结论1.山核桃外果皮乙醇提取石油醚萃取部位相对于其他提取部位对HepG2、SGC7901、SW620细胞的增殖抑制作用最为显著。2.大黄素、球松素、5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮都能抑制肿瘤细胞增殖,呈现剂量依赖性。大黄素效果最为显著。3.5-羟基-7,’-二甲氧基黄酮对HepG2与SW620中的v-Src蛋白表达的抑制作用比大黄素强,而大黄素对肿瘤细胞的增殖抑制作用较5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮强,提示5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮可能通过其他途径或联合效应发挥抑瘤作用。4.大黄素能抑制三种肿瘤细胞中p38MAPK蛋白的表达;5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮能显著抑制HepG2、SW620细胞中p38MAPK蛋白的表达,而对SGC7901细胞中的p38MAPK蛋白无影响。5.大黄素能有效抑制各肿瘤细胞的MMP-2与MMP-9蛋白表达;5-羟基-7,4’-二甲氧基黄酮能抑制SGC7901中MMP-2蛋白表达,对于其余各肿瘤细胞无明显影响。