论文部分内容阅读
Raman光谱利用光与物质的相互作用,通过对物质的Raman散射光进行探测,人们可以得到物质的组成成分、化学键和分子结构等方面的信息。细胞水平上的分子行为研究是当今细胞分子生物学研究的热点和前沿领域。需要高精度的原位、非干预、非破坏的探测技术。显微术与Raman光谱探测结合,就构成了显微Raman光谱技术。将入射激光通过显微镜聚焦到样品上,这样光在样品上的作用点非常小,在不受到周围物质干扰的情况下,可以精确地获得样品微区的组成成分、结构、分子取向等各种Raman光谱信息。因此,显微Raman光谱技术非常适合对单细胞水平上的分子行为探测,研究其DNA、蛋白质、脂类物质和碳水化合物等组成和分子行为,是活细胞的分子行为探测的有力工具。
由于背景噪声和细胞结构的复杂性,由光谱仪得到的细胞样品的Raman光谱信噪比非常低,而且由于生物细胞个体差异较大,因此即便是同一亚群的细胞,得到的光谱也存在较大差异。如果将多个细胞谱线进行平均进行对照分析,会导致平均的过程掩盖光谱中包含的很多细微信息。本文利用统计数据分析方法对显微Raman光谱进行分析,不仅可以使得光谱中的细微信息不被掩盖,而且可以使每条谱线的数据得到有效利用。本论文的主要研究工作和成果如下:
1.利用显微拉曼光谱,结合主成分分析法与聚类分析法,对阿霉素诱导 K562细胞凋亡的分子机制进行研究,结果表明:与传统方法的研究结果类似,破断DNA是阿霉素诱导K562细胞凋亡的分子机制;
2.在以上工作的基础上,利用显微拉曼光谱,结合主成分分析法与聚类分析法,对不同信号传导通道T细胞活化的分子机制进行研究,结果表明:CD3/CD28激活的T细胞,通过T细胞受体TCR与相应的抗原肽-MHC分子结合,同时CD28分子,与细胞抗原呈递细胞表面的B7分子结合后,DNA含量减少较多,蛋白质含量增多较多,通过PHA激活的T细胞,其产生非特异性活化,DNA含量减少的较少,蛋白质含量增加的也较少。