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目的:乙醇是常见的成瘾药物之一,研究表明,中脑边缘多巴胺系统(mesolimbic dopamine system,MLDS)在药物依赖中扮演着重要角色。随着近年来对脑内谷氨酸递质系统的了解,许多实验发现谷氨酸(Glutamate,Glu)系统也在成瘾中起着重要作用。本文拟观察乙醇处理组大鼠脑内亲代谢型谷氨酸受体1(metabotropic glutamate receptor1,mGluR1)的表达变化,探讨mGluR1与酒精成瘾的关系,为酗酒的治疗及戒断提供实验依据。
方法:从武警医学院实验动物中心选取18只3月龄、雄性Wistar大鼠,随机分作对照组和乙醇处理组,对照组大鼠正常饲养,乙醇处理组以20%酒精代替饮水。实验动物饲养6个月。1.免疫组织化学研究:大鼠深麻醉下经心灌注固定取脑及后固定,置于4℃蔗糖溶液过夜。把需要脑块行冠状位切片,进行免疫组织化学染色,贴片、封片。用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统分析所观察脑区Glu能免疫反应阳性元mGluR1的静态灰度值。2流式细胞学检测:大鼠断头取所需脑组织,搓洗、收集细胞悬液,离心。加入兔抗mGluR1多克隆抗体室温孵育,洗涤,加入羊抗兔藻红素蛋白(PE-IgG)二抗工作液避光室温孵育,加入PBS10ml离心,弃上清,铜网过滤后上机检测,电脑记录,计数mGluR1的表达量X-mode值。3.Western-Blot检测:大鼠断头取脑组织,裂解、研磨,取上清,蛋白质定量,分装,进行电泳、电转至PVDF膜,免疫显色,显影,定影。底片透扫,对Western条带进行定量分析,确定杂交条带的相对吸光度值。
结果:1.免疫组织化学结果:正常大鼠黑质、腹侧被盖区、苍白球、伏核均显示较明显的mGluR1免疫阳性反应,苍白球mGluR1免疫反应表现为细小点状的神经毡染色;黑质为相对粗大的mGluR1免疫反应神经突起染色。与对照相比,乙醇处理组大鼠mGluR1免疫染色灰度值降低(P<0.05)。2.流式细胞学检测结果:与对照相比,乙醇处理组大鼠mGluR1的表达量增加(P<0.05)。3.Western—Blot检测结果:与对照组相比,乙醇处理组大鼠各脑区mGluR1与β-actin条带相对吸光度比值增加(P<0.01)。
结论:乙醇处理引起大鼠脑内mGluR1表达增加,可能与酒精成瘾有关。