广西猕猴粪便中诺如病毒与星状病毒的全基因组序列分析

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目的:了解广西龙虎山猕猴诺如病毒和星状病毒的感染状态,分析其全基因组序列、探讨遗传进化及与人类间的关系。方法:采用RT-PCR方法对收集的广西龙虎山猕猴粪便标本进行诺如病毒和星状病毒筛查,挑选阳性标本各一份进行基因扩增、克隆、测序、拼接,获得基因组全长。通过GenBank中Blastx在线比对分析,利用MEGA6.0软件进行多序列比对及遗传进化分析。结果:1.筛查发现,400份标本中诺如病毒阳性2份,阳性率为0.5%;星状病毒1份,阳性率为0.25%。2.获得的诺如病毒基因组全长为7565nt(包括PloyA尾),分为三个 ORFs:ORF1(10~5112nt)、ORF2(5093~6715nt)和 ORF3(6715~7494nt)。全基因组分析显示其与人GII.17型诺如病毒CUHK-NS-613(GenBank 登录号:KU561248)同源性最高(99.5%)。ORF1、ORF3区核苷酸和氨基酸序列都与CUHK-NS-613同源性最高(99.5%和 99.4%,99.5%和 99.2%);ORF2 区与人GⅡ.17 型诺如病毒CUHK-NS-491(GenBank登录号:KP698928)同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.4%和99.8%,仅P1.1区有一个氨基酸的突变aa245P→S。此外,RdRp核苷酸和VP1氨基酸序列进化树分析显示,该病毒株与人GII.17型诺如病毒CUHK-NS-613和CUHK-NS-491的进化关系最近,而与猕猴GII.17型诺如病毒KM1509(GenBank登录号:KX356908)次之。3.获得的星状病毒基因组全长为7377nt(包括PloyA尾),其分为三个 ORFs:ORFla(120-3185nt)、ORFlb(3176-4705nt)、ORF2(4729-7239nt)。经氨基酸序列比对显示,ORFla区与鸭子星状病毒(GenBank登录号:JX624774)具有高度同源性(29%),ORF1b区与鸭子星状病毒(GenBank登录号:FJ919227)有高度同源性(49%),ORF2区与野生鸽子星状病毒(GenBank登录号:FR727148)具有高度同源性(37%)。同时,ORF1a、ORF1b及ORF2区氨基酸序列进化分析显示,其与哺乳动物星状病毒属关系较远,与禽星状病毒属关系相对较近,但形成一个独立进化分枝。此外,对其衣壳蛋白氨基酸遗传距离分析发现,其与禽星状病毒属中代表株遗传距离为0.759,根据国际病毒分类委员会(ICTV)提出的禽星状病毒属种间分类标准,推测其可能为禽星状病毒属中的一个新种。结论:在广西猕猴粪便中发现的星状病毒可能为禽星状病毒属中的一个新种;GII.17型诺如病毒可能为人-猕猴共患病毒。
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