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肺结核是长期严重危害人类健康的慢性传染性疾病,也是单因素所致感染性疾病中病死率最高的疾病之一。造成肺结核慢性持续感染的原因十分复杂多样,涉及结核分枝杆菌和宿主免疫反应等多个方面。结核病患者多数有免疫功能抑制,细胞免疫功能低下等特征,抗结核病免疫主要是由是树突状细胞(dendritic cell, DC)激活的、T淋巴细胞介导的细胞免疫应答过程,对结核的发病和演变具有决定性的意义。DC可分为两个亚群：DC1主要发挥抗原提呈的功能,促进Thl细胞极化和细胞免疫的发生；DC2主要产生Ⅰ型干扰素(IFN-a),促进Th2细胞极化和体液免疫的发生。DC功能的异常可导致抗病能力的下降,与肺结核的发生发展相关。PD-1/PD-L介导负性协同刺激信号,主要表达于T、B和单核等淋巴细胞表面,发挥抑制免疫功能的作用,业已发现,T细胞活化除必须有抗原信号激发外还必须获得协同刺激信号。免疫细胞所获得的正性和负性协同刺激信号需要达到相对平衡以使免疫应答适时开启又能恰当终止。PD-1/PD-L途径介导的负性信号能有效抑制T、B细胞功能,在机体免疫应答后期的负性调节中发挥了至关重要的作用,并在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫和感染性等疾病的发生发展中具有重要的生物学意义。本研究通过对肺结核患者进行了DC1、DC2及Th1、Th2的检测,并对各组的检测结果进行了相关性的分析,从而探讨肺结核患者外周血树突状细胞(DCs)与T辅助(Th)细胞水平的变化及其临床意义。与此同时,应用免疫荧光和单克隆抗体标记技术检测分析肺结核患者外周血淋巴细胞表面PD-1/PD-L1分子的表达特性,探讨该负性协同刺激信号在介导肺结核患者免疫耐受的中的生物学意义。第一部分肺结核患者外周血树突状细胞亚群和Th细胞分析与临床意义的研究[目的]探讨树突状细胞亚群与T辅助细胞分化在肺结核患者外周血中的变化,以及相互之间的关系。[方法]利用流式细胞仪对63例初治肺结核患者、30例健康人外周血树突状细胞亚群(DC1和DC2)与T细胞亚群按疾病分组进行检测。同时进行膜上和胞内标记,分别测得HLA-DR+CD123+(DC2)、HLA-DR+CD11c+(DC1)、CD4+IL-4+(Th2)、CD4+IFN-γ+(Th1)四种细胞的含量。[FITC:异硫氰酸荧光素、PE：藻红蛋白、APC:别藻蓝蛋白。PerCP:叶绿素蛋白复合物][结果](1)浸润性肺结核、结核性胸膜炎、粟粒型肺结核患者外周血中DC1、Thl含量均显著低于健康对照组(前两者P<0.05后者P<0.01)。Th2含量均显著高于健康对照组(前两者P<0.05后者P<0.01)；(2)DC2含量在这三个病程中有下降趋势,前两者无显著差异(P>0.05),而粟粒型肺结核显著低于健康对照组(P<0.05)。粟粒型肺结核与浸润性肺结核患者外周血中Thl.Th2含量有显著差异(P<0.05)；(3)糖尿病(DM)并肺结核患者DC1、DC2、Th1含量显著低于肺结核组(P<0.05),Th2含量显著高于肺结核组(P<0.05)：(4)15例重度肺结核患者经结核化疗与微卡治疗三个月前后DC1、DC2、Th1水平较治疗前明显升高(P<0.05),而Th2水平较治疗前显著降低(P<0.01)。[结论]浸润性肺结核、结核性胸膜炎、粟粒型肺结核患者存在着不同程度的免疫功能抑制,DC1、DC2表达水平调控着Th0向Th1、Th2分化,Thl、Th2的分化也间接的负反馈调节DC1、DC2表达,维持这种平衡对疾病的转归有重要意义。第二部分PD-1/PD-L1在肺结核患者外周血淋巴细胞表面的表达特性及其生物学意义[目的]分析协同刺激分子PD-1在肺结核患者外周血中各T细胞亚群上的表达特性,探讨该负性协同刺激分子在介导肺结核患者免疫耐受的中的生物学意义。[方法]选择临床初诊肺结核患者(77例)为研究对象,其中肺结核组27例,结核并发感染41例,结核并发糖尿病9例,健康对照组29例,同时选取23例确诊为肺部感染的患者为对照组。应用免疫荧光标记和流式细胞术检测PD-1分子在各组人T淋巴细胞亚群上的表达水平；以及B淋巴细胞与单核细胞上PD-L1的表达水平。[结果](1)与健康对照组相比,肺结核患者CD3细胞比例无显著变化(P>0.05),而肺部感染患者CD3显著增加(P<0.05)；肺结核患者与肺部感染患者CD4+T细胞显著增加(P<0.01)；CD8+T细胞表达则显著降低(P<0.05)；(2)与对照组相比,CD4+CD25+T细胞亚群在T细胞中的百分比明显升高(P<0.01),肺结核患者外周血中T淋巴细胞表面PD-1分子表达显著增强,尤其在CD8+T细胞更为显著(P<0.01),且痰涂片阴性患者PD-1分子表达显著高于痰涂片阳性患者(P<0.05)；(3)肺部感染患者与健康对照相比,PD-1的表达也呈现明显增强的特征,尤其CD4+CD25+T细胞上PD-1的表达,肺部感染患者显著高表达与肺结核患者(P<0.05)；(4)与健康对照组相比,肺结核B淋巴细胞PD-L1表达显著高于健康对照组(P<0.01)；(5)单核细胞PD-L1.表达,在肺结核组与肺部感染患者均高表达于健康对照组,其中肺结核组P<0.05,肺部感染患者P<0.01。[结论]负性协同刺激分子PD-1在肺结核患者T淋巴细胞上调表达,且与肺结核合并其他疾病有关,PD-L1在肺结核患者单核细胞和B细胞呈上调表达,由此提示PD-1/PD-L1途径可能与结核病免疫耐受的发生发展及慢性化炎症过程。综上所述,本研究获得了以下研究结果：(1)肺结核患者外周血中免疫细胞比例异常；(2)肺结核患者外周血中Thl极化与疾病的恶性程度呈负相关；(3)糖尿病并肺结核患者外周血中Th1/Th2细胞含量失衡；(4)肺结核患者治疗疗效与Th细胞平衡相关,Th细胞极化与结核杆菌密切相关；(5)肺结核患者外周血中CD4+和CD8+T细胞比例出现失衡；(6)肺结核患者外周血中CD4+CD25+T比例显著增加；(7)肺结核患者外周血CD8+T细胞高表达PD-1,而PD-L1在肺结核患者单核细胞和B细胞表面也呈现上调表达。