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目的:1对86例咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)患者进行中医证候学调查,探究CVA中医证候分布规律,为CVA的临证治疗提供进一步的参考。2观察慢咳方对CVA大鼠模型NF-κB信号通路上游IL-1β、TNF-α,下游TGF-β1、MMP-9以及其特异性抑制因子IκB表达的影响,探讨慢咳方治疗CVA的分子机制。方法:1临床研究:在查阅大量相关文献及结合导师临证经验的基础上,制定出CVA临床调查表,对符合入选标准的86例患者的资料,利用统计软件,分析性别、年龄、地区、职业、吸烟情况等与证候学的关系,总结归纳出CVA的中医证候分布特点。2实验研究:将72只健康雄性SD大鼠,以每组12只,分成空白对照组(Control组),模型对照组(Model组),慢咳方高剂量组(MKPH组)、慢咳方中剂量组(MKPM组)、慢咳方低剂量组(MKPL组)、苏黄组(SH组)。使用卵蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏、激发,制备CVA大鼠模型。于实验的第15天起,慢咳方各剂量组和苏黄组开始给予相关药物灌胃治疗,空白对照组予以生理盐水灌胃,连续给药14天。末次灌胃后,观察各组大鼠咳嗽次数变化情况,并于24小时内取材。通过HE(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察大鼠肺组织炎症情况;运用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的表达水平;蛋白质免疫印迹试验(Western Blotting,WB)法检测各组大鼠肺组织中NF-κB、IκB蛋白的表达水平;q RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中NF-κB、IκB m RNA的表达水平。结果:1临床研究:在调查的86例CVA患者中,风邪犯肺证34例(占39.53%),痰湿蕴肺证16例(占18.60%),肾阳不足证12例(占13.95%),肺气亏虚证10例(占11.63%),脾气不足证5例(占5.81%),风寒袭肺证4例(占4.65%),瘀阻肺络证3例(占3.49%),肝火犯肺证2例(占2.33%)。2实验研究:2.1咳嗽次数的统计:与空白对照组相比,模型组的咳嗽次数明显增多(P<0.01),与模型组相比,慢咳方高剂量组、慢咳方中剂量组、慢咳方低剂量组以及苏黄组咳嗽次数减少(P<0.01),且慢咳方高剂量组、苏黄组咳嗽次数要少于慢咳方中剂量组、慢咳方低剂量(P<0.01),慢咳方高剂量组与苏黄组比较无统计学差异(P>0.05)。2.2病理组织HE染色结果:空白对照组中肺组织形态基本正常,各层结构清晰,支气管及周围血管未见明显炎性细胞浸润,气管粘膜上皮未见明显异常,气道未见明显狭窄。模型组中肺泡及支气管等组织结构紊乱,上皮细胞增生、脱落,可见大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞、杯状细胞、中性粒细胞等多见;血管壁增厚,气道狭窄、管壁增厚,可见粘液栓。与模型组对比,慢咳方低剂量组中嗜酸性粒细胞、杯状细胞、中性粒细胞等炎症细胞减少,气腔壁增厚,管腔狭窄。慢咳方中剂量组要优于慢咳方低剂量组,其肺组织结构形态好转,炎症细胞浸润减轻,粘膜下水肿明显减轻,气道狭窄较少见。慢咳方高剂量组中炎症细胞浸润较少,管壁未见明显增厚,气道上皮细胞较为完整。苏黄组肺组织病理形态与慢咳方高剂量组相似。2.3 Elisa检测结果:与空白对照组相比,模型组血清中IL-1β、TGF-β1、TNF-α、MMP-9、TIMP-1的水平以及MMP-9/TIMP-1比值明显升高(P<0.01)。与模型组相比,慢咳方高剂量组、慢咳方中剂量组、慢咳方低剂量组以及苏黄组血清中IL-1β、TGF-β1、TNF-α、MMP-9、TIMP-1的含量以及MMP-9/TIMP-1比值明显降低(P<0.01,P<0.05)。且与其它治疗组相比,慢咳方高剂量组降低IL-1β、TGF-β1、TNF-α、MMP-9、TIMP-1的含量以及MMP-9/TIMP-1比值的作用更加显著(P<0.01,P<0.05)。与空白对照组相比,模型组中NF-κBp50、NF-κBp65 m RNA的表达升高(P<0.01),IκB基因表达明显降低(P<0.01)。与模型组相比,慢咳方高剂量组、慢咳方中剂量组、慢咳方低剂量组以及苏黄组中NF-κBp50、NF-κBp65 m RNA的表达降低(P<0.01,P<0.05),慢咳方高剂量组、慢咳方中剂量组以及苏黄组中IκB m RNA表达升高,且具有统计学差异(P<0.01),慢咳方低剂量组与模型组相比,IκB m RNA表达也升高,但不具有统计学差异(P>0.05)。且与其它治疗组相比慢咳方高剂量组降低NF-κBp50、NF-κBp65 m RNA水平,升高IκB m RNA水平的作用最显著。2.5 Western Blot检测结果:与空白对照组相比,模型组中NF-κBp50、NF-κBp65蛋白的表达升高(P<0.01),IκB蛋白的表达降低(P<0.01)。与模型组相比,慢咳方高剂量组、慢咳方中剂量组、慢咳方低剂量组以及苏黄组中NF-κBp50、NF-κBp65蛋白的表达降低(P<0.01),IκB蛋白的表达升高(P<0.01)。且与其它治疗组相比,慢咳方高剂量组降低NF-κBp50、NF-κBp65蛋白水平,升高IκB蛋白水平的作用最显著(P<0.01,P<0.05)。2.4 q RT-PCR检测结果:结论:1在所调查的86例CVA患者中,发病因素以风、痰、虚居多。2慢咳方可以通过下调大鼠体内TNF-α、IL-1β、TGF-β1的水平,减轻气道炎症反应,从而抑制大鼠咳嗽变异性哮喘。3慢咳方可以通过下调大鼠体内MMP-9的水平,调节MMP-9/TIMP-1的平衡,减少细胞外基质的沉积,从而抑制大鼠CVA。4慢咳方可以通过下调大鼠肺组织中NF-κB的表达,上调IκB的表达,抑制NF-κB信号通路,抑制大鼠CVA,其中尤以慢咳方高剂量组的作用更加显著。5慢咳方可能通过减少NF-κB信号通路下游TGF-β1以及MMP-9的表达,减少细胞外基质的沉积,抑制大鼠CVA。