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目的：
糖尿病视网膜病变(diabetic ratinopathy, DR)是DM最常见和最严重的并发症之一，是成年人后天性低视力的主要原因。临床主要分为非增殖期DR(Nonproliferative diabetic retinopathy, NPDR)和增殖期DR(Proliferative diabetic retinopathy, PDR)。非增殖期DR主要表现为眼底的微动脉瘤、静脉串珠样改变、视网膜点状出血、硬性渗出等，如果病情进一步发展将会导致患者视力减退乃至失明。现代医学对于早期的糖尿病视网膜病变无特效治疗方法，疗效比较肯定的就是羟苯磺酸钙。羟苯磺酸钙可减轻视网膜的渗出、出血及微血管瘤的形成，可改善视网膜的缺血缺氧状态，因此广泛应用于NPDR。传统中医讲求辩证论治和整体观，除了治疗视网膜局部病变，还追求糖尿病患者全身症状的改善。近年来，传统医药治疗非增殖期DR的研究颇多，成果颇丰，表现出一定优势。
本课题以糖网I号为主线，通过临床和动物实验两条途径，目的是观察糖网I号治疗气阴两虚的非增殖期DR的治疗效果及其对链脲佐菌素(STZ)诱导的C57BL/6J糖尿病小鼠视网膜形态结构的影响，研究视网膜VEGF和PEDF表达变化，探讨糖网I号治疗非增殖期DR的可能机制，为糖网I号治疗非增殖期DR提供理论基础，也为寻找中医治疗非增殖期DR提供新的思路。
方法：
第一部分：选取2015年6月至2017年6月到青岛即墨区中医医院就诊的非增殖期DR患者，且中医辩证符合气阴两虚证，患者签订知情同意书，将口服羟苯磺酸钙药物的患者归为西药治疗组，口服糖网I号的患者归为中药治疗组，将仅接受控制血糖基础治疗的患者归为对照组。根据《中药新药临床研究指导原则》对试验中所有患者病变症状量化赋分，比较各组患者的症状赋分有无差异。E字国际标准视力表观察记录患者用药前后的最佳矫正视力；眼底照相观察患者视网膜血管瘤数量变化，出血渗出范围变化；视网膜荧光素钠血管造影(Fluorescein sodium fundus angiography, FFA)观察视网膜的血管渗漏改变，无灌注区范围变化及有无黄斑水肿；光相干断层扫描(Optical correlation tomography, OCT)测量各组中黄斑水肿患者的黄斑中心凹厚度。统计比较各组间及同组治疗3个月和6个月后指标差别有无统计学意义。
第二部分：选取C57BL/6J小鼠，设立正常对照组，其余腹腔注射0.1%的STZ建立糖尿病小鼠模型，随机分为羟苯磺酸钙组、糖网I号组、糖尿病对照组，分别给予羟苯磺酸钙、糖网I号、生理盐水灌胃3个月。实验结束，颈椎脱臼处死小鼠，取小鼠眼球，右眼用于HE和免疫组化检测，左眼取视网膜组织冻存用于PCR定量检测。HE染色观察小鼠视网膜形态学变化，免疫组化方法观察小鼠视网膜VEGF和PEDF的表达，荧光RT-PCR方法检测视网膜VEGFmRNA和PEDFmRNA表达变化。
结果：
第一部分：选取患者150人，研究过程中脱失18人，共132例患者完成试验。糖尿病患者全身症状分级量化得分比较：对照组在用药3个月和6个月后较治疗前评分均增加，差别有统计学意义(P＜0.05)。西药治疗组3个月后症状积分与治疗前差别无统计学意义(P=0.52)，而治疗6个月后积分下降，差别有统计学意义(P＜0.05)。中药治疗组经糖网I号治疗后3个月和6个月的症状积分都有下降，且与治疗前相比差别有统计学意义(P＜0.01)，糖网I号治疗6个月后比治疗3个月积分下降，差别有统计学意义(P＜0.05)；疗效比较：用药3个月，西药治疗组和中药治疗组显效率分别为24.0%和27.7%；有效率分别为46.0%和48.9%；无效率分别为24.0%和17.0%；恶化率分别为6.0%和6.4%，总有效率分别为70.0%和76.6%。两组均比对照组总有效率高，差别有统计学意义(P＜0.05)，两组间差别无统计学意义。用药6个月，西药治疗组和中药治疗组显效率分别为26.0%和29.8%；有效率分别为44.0%和51.1%；无效率分别为24.0%和12.8%；恶化率分别为6.0%和6.3%，总有效率分别为70.0%和80.9%，两组均比对照组总有效率高，差别有统计学意义(P＜0.05)，两用药组组间差别无统计学意义。各组黄斑水肿患者的黄斑中心凹厚度分别为：251.32±14.72um，249.15±33.22um，253.72±19.85um；用药3个月后黄斑中心凹厚度分别为：272.39±21.52um，230.89±15.96um，220.36±19.52um；用药6个月黄斑中心凹厚度分别为：259.83±16.71um，210.79±20.15um，180.38±18.51um。中医治疗组与对照组相比，黄斑中心凹厚度在用药3个月和6个月都有减轻，差别有统计学意义(P＜0.05)。3个月和6个月间黄斑中心凹厚度差别无统计学意义。西药治疗组中心凹厚度在用药期间与对照组差别均无统计学意义。第二部分：50只C57BL/6J小鼠，共30只造模成功，成功率达71.42%。造模后1周，成模4周，8周和12周小鼠体重和血糖较正常对照组差别明显，差别有统计学意义(P＜0.05)。在光镜下HE染色可见正常对照组小鼠视网膜各层细胞排列整齐，神经节细胞单层排列，内核层较薄，外核层较厚，视网膜的内界膜完整，未见毛细血管内皮细胞突破内界膜。而糖尿病对照组小鼠视网膜各层组织疏松水肿，神经节细胞排列松散不规则，视网膜内界膜略肿胀，偶有毛细血管内皮细胞突出于内界膜，羟苯磺酸钙组和糖网I号组比糖尿病对照组小鼠视网膜病变轻。免疫组化示正常对照组视网膜VEGF主要分布在神经节细胞层，在内核层中也少量的表达，表现为弱阳性，呈淡黄色。糖尿病对照组小鼠的视网膜各层几乎都有VEGF的阳性表达，呈棕黄色。羟苯磺酸钙组和糖网I号组VEGF的表达主要在内丛状层、内核层以及视网膜神经节细胞层，外核层也有一定阳性表达，呈黄色。正常对照组小鼠视网膜PEDF呈较强阳性反应，各层面均有表达，呈棕黄色。糖尿病对照组小鼠PEDF仅在视网膜的内丛状层及神经节细胞层面有所表达呈淡黄色。羟苯磺酸钙组和糖网I号组PEDF在内丛状层、内核层及神经节细胞层有表达，呈淡黄色。图像分析测定的计分光密度值(Integated optical density，IOD)表明，糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比，小鼠视网膜VEGF阳性颗粒IOD值增加，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组和羟苯磺酸钙组比糖尿病对照组小鼠视网膜VEGF阳性颗粒IOD值下降，差别有统计学意义(P＜0.05)，而糖网I号组和羟苯磺酸钙组VEGF的IOD值差别无统计学意义。与正常对照组相比，糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组小鼠视网膜PEDF阳性颗粒IOD值下降，差别有统计学意义(P＜0.05)。而三组间IOD值差别无统计学意义。荧光RT-PCR结果显示：糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比，VEGFmRNA表达均是增加的，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组和羟苯磺酸钙组比糖尿病对照组的VEGF基因表达低，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组与羟苯磺酸钙组VEGF基因表达差异无统计学意义。糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比PEDFmRNA表达均是下降的，差别有统计学意义(P＜0.05)，而三组间PEDFmRNA表达差别无统计学意义。
结论：糖网I号对气阴两虚的非增殖期DR患者有治疗作用，包括改善症状，提高视力和(或)减少视网膜血管瘤及血管渗漏，减轻黄斑水肿等作用。糖网I号对非增殖期糖尿病视网膜病变的治疗可能通过抑制视网膜VEGF蛋白及基因表达，重塑VEGF和PEDF的动态平衡发挥作用。
糖尿病视网膜病变(diabetic ratinopathy, DR)是DM最常见和最严重的并发症之一，是成年人后天性低视力的主要原因。临床主要分为非增殖期DR(Nonproliferative diabetic retinopathy, NPDR)和增殖期DR(Proliferative diabetic retinopathy, PDR)。非增殖期DR主要表现为眼底的微动脉瘤、静脉串珠样改变、视网膜点状出血、硬性渗出等，如果病情进一步发展将会导致患者视力减退乃至失明。现代医学对于早期的糖尿病视网膜病变无特效治疗方法，疗效比较肯定的就是羟苯磺酸钙。羟苯磺酸钙可减轻视网膜的渗出、出血及微血管瘤的形成，可改善视网膜的缺血缺氧状态，因此广泛应用于NPDR。传统中医讲求辩证论治和整体观，除了治疗视网膜局部病变，还追求糖尿病患者全身症状的改善。近年来，传统医药治疗非增殖期DR的研究颇多，成果颇丰，表现出一定优势。
本课题以糖网I号为主线，通过临床和动物实验两条途径，目的是观察糖网I号治疗气阴两虚的非增殖期DR的治疗效果及其对链脲佐菌素(STZ)诱导的C57BL/6J糖尿病小鼠视网膜形态结构的影响，研究视网膜VEGF和PEDF表达变化，探讨糖网I号治疗非增殖期DR的可能机制，为糖网I号治疗非增殖期DR提供理论基础，也为寻找中医治疗非增殖期DR提供新的思路。
方法：
第一部分：选取2015年6月至2017年6月到青岛即墨区中医医院就诊的非增殖期DR患者，且中医辩证符合气阴两虚证，患者签订知情同意书，将口服羟苯磺酸钙药物的患者归为西药治疗组，口服糖网I号的患者归为中药治疗组，将仅接受控制血糖基础治疗的患者归为对照组。根据《中药新药临床研究指导原则》对试验中所有患者病变症状量化赋分，比较各组患者的症状赋分有无差异。E字国际标准视力表观察记录患者用药前后的最佳矫正视力；眼底照相观察患者视网膜血管瘤数量变化，出血渗出范围变化；视网膜荧光素钠血管造影(Fluorescein sodium fundus angiography, FFA)观察视网膜的血管渗漏改变，无灌注区范围变化及有无黄斑水肿；光相干断层扫描(Optical correlation tomography, OCT)测量各组中黄斑水肿患者的黄斑中心凹厚度。统计比较各组间及同组治疗3个月和6个月后指标差别有无统计学意义。
第二部分：选取C57BL/6J小鼠，设立正常对照组，其余腹腔注射0.1%的STZ建立糖尿病小鼠模型，随机分为羟苯磺酸钙组、糖网I号组、糖尿病对照组，分别给予羟苯磺酸钙、糖网I号、生理盐水灌胃3个月。实验结束，颈椎脱臼处死小鼠，取小鼠眼球，右眼用于HE和免疫组化检测，左眼取视网膜组织冻存用于PCR定量检测。HE染色观察小鼠视网膜形态学变化，免疫组化方法观察小鼠视网膜VEGF和PEDF的表达，荧光RT-PCR方法检测视网膜VEGFmRNA和PEDFmRNA表达变化。
结果：
第一部分：选取患者150人，研究过程中脱失18人，共132例患者完成试验。糖尿病患者全身症状分级量化得分比较：对照组在用药3个月和6个月后较治疗前评分均增加，差别有统计学意义(P＜0.05)。西药治疗组3个月后症状积分与治疗前差别无统计学意义(P=0.52)，而治疗6个月后积分下降，差别有统计学意义(P＜0.05)。中药治疗组经糖网I号治疗后3个月和6个月的症状积分都有下降，且与治疗前相比差别有统计学意义(P＜0.01)，糖网I号治疗6个月后比治疗3个月积分下降，差别有统计学意义(P＜0.05)；疗效比较：用药3个月，西药治疗组和中药治疗组显效率分别为24.0%和27.7%；有效率分别为46.0%和48.9%；无效率分别为24.0%和17.0%；恶化率分别为6.0%和6.4%，总有效率分别为70.0%和76.6%。两组均比对照组总有效率高，差别有统计学意义(P＜0.05)，两组间差别无统计学意义。用药6个月，西药治疗组和中药治疗组显效率分别为26.0%和29.8%；有效率分别为44.0%和51.1%；无效率分别为24.0%和12.8%；恶化率分别为6.0%和6.3%，总有效率分别为70.0%和80.9%，两组均比对照组总有效率高，差别有统计学意义(P＜0.05)，两用药组组间差别无统计学意义。各组黄斑水肿患者的黄斑中心凹厚度分别为：251.32±14.72um，249.15±33.22um，253.72±19.85um；用药3个月后黄斑中心凹厚度分别为：272.39±21.52um，230.89±15.96um，220.36±19.52um；用药6个月黄斑中心凹厚度分别为：259.83±16.71um，210.79±20.15um，180.38±18.51um。中医治疗组与对照组相比，黄斑中心凹厚度在用药3个月和6个月都有减轻，差别有统计学意义(P＜0.05)。3个月和6个月间黄斑中心凹厚度差别无统计学意义。西药治疗组中心凹厚度在用药期间与对照组差别均无统计学意义。第二部分：50只C57BL/6J小鼠，共30只造模成功，成功率达71.42%。造模后1周，成模4周，8周和12周小鼠体重和血糖较正常对照组差别明显，差别有统计学意义(P＜0.05)。在光镜下HE染色可见正常对照组小鼠视网膜各层细胞排列整齐，神经节细胞单层排列，内核层较薄，外核层较厚，视网膜的内界膜完整，未见毛细血管内皮细胞突破内界膜。而糖尿病对照组小鼠视网膜各层组织疏松水肿，神经节细胞排列松散不规则，视网膜内界膜略肿胀，偶有毛细血管内皮细胞突出于内界膜，羟苯磺酸钙组和糖网I号组比糖尿病对照组小鼠视网膜病变轻。免疫组化示正常对照组视网膜VEGF主要分布在神经节细胞层，在内核层中也少量的表达，表现为弱阳性，呈淡黄色。糖尿病对照组小鼠的视网膜各层几乎都有VEGF的阳性表达，呈棕黄色。羟苯磺酸钙组和糖网I号组VEGF的表达主要在内丛状层、内核层以及视网膜神经节细胞层，外核层也有一定阳性表达，呈黄色。正常对照组小鼠视网膜PEDF呈较强阳性反应，各层面均有表达，呈棕黄色。糖尿病对照组小鼠PEDF仅在视网膜的内丛状层及神经节细胞层面有所表达呈淡黄色。羟苯磺酸钙组和糖网I号组PEDF在内丛状层、内核层及神经节细胞层有表达，呈淡黄色。图像分析测定的计分光密度值(Integated optical density，IOD)表明，糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比，小鼠视网膜VEGF阳性颗粒IOD值增加，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组和羟苯磺酸钙组比糖尿病对照组小鼠视网膜VEGF阳性颗粒IOD值下降，差别有统计学意义(P＜0.05)，而糖网I号组和羟苯磺酸钙组VEGF的IOD值差别无统计学意义。与正常对照组相比，糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组小鼠视网膜PEDF阳性颗粒IOD值下降，差别有统计学意义(P＜0.05)。而三组间IOD值差别无统计学意义。荧光RT-PCR结果显示：糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比，VEGFmRNA表达均是增加的，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组和羟苯磺酸钙组比糖尿病对照组的VEGF基因表达低，差别有统计学意义(P＜0.05)。糖网I号组与羟苯磺酸钙组VEGF基因表达差异无统计学意义。糖网I号组，羟苯磺酸钙组和糖尿病对照组与正常对照组相比PEDFmRNA表达均是下降的，差别有统计学意义(P＜0.05)，而三组间PEDFmRNA表达差别无统计学意义。
结论：糖网I号对气阴两虚的非增殖期DR患者有治疗作用，包括改善症状，提高视力和(或)减少视网膜血管瘤及血管渗漏，减轻黄斑水肿等作用。糖网I号对非增殖期糖尿病视网膜病变的治疗可能通过抑制视网膜VEGF蛋白及基因表达，重塑VEGF和PEDF的动态平衡发挥作用。