应用表面增强拉曼光谱和上转换发光免疫层析技术检测旋毛虫的研究

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzssxxzzssxx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
旋毛虫(Trichinella spiralis,T.spiralis)是一种人兽共患食源性寄生虫,生食或半生食含有旋毛虫的猪肉及其产品是人类感染旋毛虫的主要方式,因感染旋毛虫而引起的疾病被称为旋毛虫病(Trichinellosis),该病呈世界性分布且严重威胁人类健康和公共安全,因此,猪旋毛虫检测被列为屠宰必检项目。目前使用的旋毛虫检测方法存在技术短板,无法满足对日常养殖和现代化屠宰加工过程中,猪体内旋毛虫的监测。因此,针对现代化大型养殖和屠宰场研发一种快速、灵敏的旋毛虫现场检测方法,对于旋毛虫病防控具有重要意义。本研究基于表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)和上转换发光免疫层析法(Upconversion phosphor immunochromatography assay,UCP-ICA)建立旋毛虫快速检测体系,为研发适用于现代化大型养殖和屠宰场的旋毛虫检测方法奠定基础,具体研究内容和结果如下:1.基于SERS建立旋毛虫检测方法。利用盐酸羟胺还原硝酸银,制备银纳米溶胶,测试其拉曼光谱增强性能及其对实验样品的影响。20只Wistar大鼠口服感染旋毛虫肌幼虫(Muscle larvae,ML)(3500条/只),并设平行空白对照组(20只Wistar大鼠)。收集血清,采用激光共聚焦显微拉曼光谱仪采集未感染的血清及感染后28天血清的SERS,对SERS进行去荧光背景及面积归一化处理。比较SERS变化以及通过多元统计分析,如主成分分析(Principal component analysis,PCA)和线性判别分析(Linear discriminant analysis,LDA),分析SERS并建模。结果表明,所制备的银纳米溶胶颗粒直径约为25 nm,大小均匀,纯度高,且具有良好的拉曼光谱增强效果。感染组和对照组在未感染旋毛虫时的血清拉曼光谱无显著差异;第28天,两组的血清拉曼光谱出现显著差异。通过PCA结合LDA构建诊断算法,发现该方法灵敏度为87.5%,特异度为94.7%,正确度为91.4%。基于以上结果,将银纳米胶体的SERS与PCA和LDA相结合,有望实现大规模、现场、快速、无标记、高准确检测,在旋毛虫病防控方面具有巨大的应用潜力。2.基于UCP-ICA建立旋毛虫免疫层析检测法。将旋毛虫排泄分泌抗原(Excretorysecretory antigens,ES)、山羊抗兔Ig G与上转换发光纳米颗粒(Upconversion nanoparticles,UCNPs)共价偶联,以山羊抗猪Ig G(800 ng/条)与兔抗山羊Ig G(200 ng/条)喷于硝酸纤维素薄膜(Nitrate cellulose sheet,NC sheet)上,分别作为检查带(T线)与质控带(C线),并且命名该方法为旋毛虫上转换发光免疫层析法(T.spiralis upconversion phosphor immunochromatography assay,Ts-UCP-ICA)。Ts-UCP-ICA优化后的最佳血清稀释倍数为1:150、最佳样品处理液为100 m M HEPES p H 7.5,270 m M Na Cl,0.5%v/v Tween-20,1%v/v BSA。通过检测169份阴性猪血清,确定Ts-UCP-ICA的低特异度cut-off值为0.1906(T/C ratio),高特异度cut-off值为0.3233。检测猪囊尾蚴、亚洲带绦虫幼虫以及弓形虫感染后的猪血清样本,结果显示,Ts-UCP-ICA特异性良好,均未发生交叉反应。检测感染100、1000、10000 ML猪血清,发现三个剂量分别在第35、30、25天可检出阳性。Ts-UCP-ICA单盲测试(Single-blinded assay)55份猪血清,使用低特异度cut-off值时,检测特异度和灵敏度均100%,使用高特异度cut-off值时,检测特异度为100%和灵敏度为80%。该方法与人工消化法的检测总符合率为87.27%,一致性系数(Kappa值)为0.7454,稳定性为4℃保存6个月有效。本论文建立的两种旋毛虫检测方法,构成“旋毛虫快速检测体系”。基于SERS建立的旋毛虫检测法具有检测速度快,高通量的特点,适合大规模样本筛查;而基于UCP-ICA建立的旋毛虫检测方法可用于可疑血清进一步确定。该检测体系可提高检测效率和检测效果,进一步提升旋毛虫流行病学调查、畜牧养殖及屠宰即时检测水平,为旋毛虫病防控提供技术保障。
其他文献
布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella,简称布菌)入侵机体后引起的传染-变态反应性人兽共患细菌病。布菌是一种典型的胞内寄生菌。布菌入侵机体后通过与宿主细胞内质网互作形成复制型菌泡(r BCV)得以在宿主细胞内复制增殖和生存。在布菌与宿主细胞内质网互作的过程中,能导致内质网的结构重组,产生内质网应激反应(ERS)及其引起的未折叠蛋白反应(UPR)。现有研究显示,
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种重要的食源性致病菌,为食品病原菌致死率最高的一种,广泛分布于自然环境中,可引起免疫力低下群体感染,引起脑膜炎、败血症、流产及中枢神经症状等临床病理变化。牛羊作为天然宿主,可将单增李斯特菌传播到相关的肉和乳产品中。目前我国对牛羊养殖及食品链中流行背景与传播规律尚未明晰,因此,调查我国牛羊主产区单增李斯特菌在牛羊养殖及食品链中的流行情况
为了进一步贯彻落实新课程改革教育理念,在中职学校开展体育教学活动的过程中凸显素质教育的导向作用,笔者通过关注个体差异与个性需求合理安排教学内容,注重感官体验和空间延展,高效应用信息技术,注重师生关系和生生关系弹性优化教学形式,在实际教学过程中走出一条“素质教育+体育教育”的创新之路,提高了体育教学水平。
《祝福》是小说集《彷徨》的首篇作品,创作于1927年,真实而深刻还原了这一时期中国农村地区的社会面貌,辛亥革命虽然成功推翻了封建帝制,但是在广大的农村地区,封建社会的基础并未被完全摧毁,底层人民仍然受到封建礼教以及宗法观念之束缚。这一时期的鲁迅从辛亥革命成功的狂喜中转入对革命的失望以及怀疑,从他将小说集命名为《彷徨》就可以看出鲁迅当时的内心世界。在《祝福》中,"祥林嫂""我"以及"鲁镇"所构
期刊
强激光场作用下原子和分子的双电离在强场物理研究中具有重要的意义,揭示了双电离过程中电子关联效应,为人们研究自然界中的电子关联提供了有效手段,其中双电离机制可以由次序双电离(SDI)和非次序双电离(NSDI)进行区分。金属原子具有外壳层活跃电子,其双电离过程在学术领域中仍然存在很多空白。目前已有对Mg原子的NSDI研究,包括电子关联动力学,以及NSDI对激光波长和激光偏振的依赖等。研究表明金属原子M
成像质量和成像效率一直是科研人员不断奋斗的目标。随着成像技术的发展,鬼成像由于其独特的优势逐渐进入大众视野,鬼成像又叫关联成像,是一种新的光学成像技术,鬼成像可以在大气湍流和极弱光的条件下实现高分辨率成像,并且抗干扰能力强,成本低。众所周知,传统的胶卷相机和现代的数码相机其采样和成像都是在同一个区域内完成的,而鬼成像将采样和重建图像两个过程分开,最终实现了“隔物成像”。本文利用二维Walsh变换完
目的 建立H1N1流感病毒感染树鼩模型,探讨流感病毒动力学变化和在呼吸系统组织中的分布特征。方法 选择3~3.5周岁成年树鼩(Tupaia Belangeri Chinensis)24只,雌雄各半,随机分为空白组(B组)和模型组(M组)各12只,使用H1N1流感病毒每只600μL(1×106.8TCID50/0.1mL)经鼻腔感染M组树鼩,在-3~10d期间每天早晨测量肛温,同时采集咽拭子、鼻拭子
强飞秒激光脉冲在空气中传输引起的非线性效应比如成丝现象一直备受关注。自聚焦现象是由空气的光克尔效应产生的,而散焦效应是由电离后产生的等离子体所带来的。自聚焦现象和散焦效应共同作用,从而实现了一种动态的平衡。会形成长而明亮的低密度等离子体通道,这就是“丝”。等离子体经历复杂的跃迁过程会辐射特征荧光光谱。通过测量飞秒激光成丝过程中的荧光光谱,可以了解激光强度、电子温度、等离子体密度及其它信息,也有助于
野上弥生子是经历明治、大正、昭和三个时代的女性作家,拥有近百年的人生阅历,曾是世界文坛最高龄的执笔作家。篠田一士、大冈升平、小田切进等都曾评价野上弥生子为夏目漱石最忠实的继承者,其中甚至有称赞其才能在夏目漱石之上者。野上弥生子是否超越夏目漱石此点不在本论文论述范围之内,但这些赞誉无疑是对野上弥生子可与夏目漱石比肩的文学才能的肯定。野上弥生子所作《海神丸》不仅是其漫长文学生涯中的转折大作,亦是大正文
目的 通过改良胸腰椎椎体穿刺点及穿刺角度,探讨改良单侧经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折的临床疗效及其优势。方法 选取2019年6月至2020年6月在我院治疗的因骨质疏松所致胸腰椎压缩性骨折患者32例,共38椎体,应用改良经皮椎体后凸成形术治疗,采用VAS评分评价患者术前、术后24 h及术后1年疼痛缓解情况;通过测量脊柱侧位X线片上术椎前缘、中部、Cobb角以及正位X线片上椎体术侧和