急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一种多发于成人的造血干/祖细胞恶性克隆性血液系统疾病。在55%以上的AML患者体内能够检测到白血病融合基因,其中MLL-r是MLL1基因发生重排所致的融合基因。在临床上,具有该类融合基因的患者对化疗药物不敏感,预后差且复发率高。因此,寻找新型有效治疗MLL-r AML的方法迫在眉睫。Sirt2是NAD⁺依赖性Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶的家族成员之一,主要定位于细胞质中,在G2/M期穿梭到细胞核内,通过选择性去乙酰化不同底物参与调控细胞周期、基因组稳定性、细胞增殖、凋亡、肿瘤发生等多种生理和病理过程。已有研究结果指出,Sirt2在AML患者体内高表达,复发患者体内表达量更高,而患者的Sirt2表达量与其风险承受能力成负相关,与其对化疗药物的耐受成正相关,因此Sirt2高表达被作为一种新的预后不良的生物标记分子来划分AML的危险等级。已有研究工作发现:1.与no-MLL-r AML细胞相比,MLL-r AML细胞中的Sirt2表达量更高;2.在MLL-ENL和MLL-AF9这两种MLL-r AML细胞中敲除Sirt2基因后,促进了AML的发生发展,包括促进细胞周期的进程、增强细胞克隆形成能力等;3.与WT MLL-r AML细胞相比,sirt2^-/-MLL-r AML细胞中NF-κB和Stat3的乙酰化水平显著上升。NF-κB和Stat3在活化状态下能进入细胞核内促进靶基因的转录,从而参与调控细胞生长增殖、凋亡等。因此我们猜想:Sirt2是不是通过抑制NF-κB和Stat3的活性来阻碍细胞周期进程、抑制细胞克隆形成能力并抑制AML的发生发展。为了验证这一猜想,分别构建了单一性抑制NF-κB或Stat3及共同抑制NF-κB和Stat3的sirt2^-/-MLL-r AML细胞,并对其细胞周期及细胞克隆形成能力进行了对比分析。结果显示:在sirt2^-/-MLL-ENL AML细胞中无论是单一性抑制NF-κB或Stat3还是同时抑制NF-κB和Stat3,其克隆形成能力与细胞周期进程与sirt2^-/-MLL-ENL AML细胞均无明显差异。在sirt2^-/-MLL-AF9 AML细胞中抑制NF-κB的活性能抑制细胞克隆形成能力,但不影响周期进程;而单一性抑制Stat3及同时抑制NF-κB和Stat3时,细胞的克隆形成能力与周期进程均无明显变化。结果说明Sirt2可能是通过其他机制来调控MLL-r AML细胞的自我更新及增殖能力以及白血病的发生发展,而不是NF-κB和stat3信号通路。而在这一研究过程中发现,与已有研究结果相反的是sirt2^-/-MLL-AF9 AML细胞的克隆形成能力明显低于WT MLL-AF9 AML细胞。经PCR鉴定细胞无误后,我们通过小鼠尾静脉移植实验发现sirt2^-/-MLL-AF9 AML细胞的致病能力远远弱于WT MLL-AF9 AML细胞,与其克隆形成能力的变化趋势相同。关于细胞克隆形成能力和致病能力所发生的变化,我们猜测可能是Sirt2通过调控细胞中c-Myc的蛋白水平从而对细胞克隆形成能力及致病能力产生了影响。为了验证这一猜测:1.Western Blot检测WT MLL-r和sirt2^-/-MLL-r AML细胞中的c-Myc蛋白水平;2.构建Sirt2^WTT OE sirt2^-/-MLL-r和Sirt2^H187Y OE sirt2^-/-MLL-r AML细胞,Western Blot验证细胞中c-Myc蛋白水平是否受到Sirt2去乙酰化酶活性的调控;3.Western Blot探究c-Myc的降解是否受蛋白酶体、calpain的调控。结果显示:Sirt2缺失后细胞中c-Myc水平显著下降,而Sirt2的去乙酰化酶活性能保护c-Myc免受蛋白酶体和calpain共同作用而降解。可能正是因为Sirt2缺失后细胞中c-Myc水平低所以才导致sirt2^-/-MLL-AF9 AML细胞的克隆形成能力及致病能力减弱。