抗NRP-1b1b2单克隆抗体的纯化、活性鉴定及其对胃癌细胞抗肿瘤活性的初步研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:fdgerg454h4
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实验目的研究neuropilin-1(NRP-1,神经纤毛蛋白-1)在人体胃癌细胞中的定位;研究抗NRP-1单克隆抗体对两株胃癌细胞株生长增殖、细胞迁移的影响。实验方法使用rProteinA亲和柱纯化蛋白法将抗NRP-1抗体从小鼠腹水中提纯,并通过SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,ELISA方法鉴定抗体的亲和力,流式细胞术观察抗体与两株胃癌细胞BGC823、MKN28的结合能力,细胞免疫荧光观察抗体在胃癌细胞表面的定位。最后,我们通过细胞增殖抑制实验,划痕实验研究抗NRP-1抗体对胃癌细胞BGC823、MKN28的增殖、迁移的影响。实验结果实验结果显示:1、纯化的抗NRP-1抗体纯度超过95%,浓度为4mg/mL;2、抗体对表达的重组NRP-1b1b2蛋白和两株胃癌细胞株有较高的亲和力;3、免疫荧光实验结果显示抗体定位在细胞表面4、细胞增殖实验、划痕实验表明抗NRP-1抗体对胃癌细胞的生长、迁移都有一定的抑制作用。结论(1)我们建立抗NRP-1抗体亲和层析纯化方法,获得一批高亲和力的抗NRP-1抗体。(2)抗NRP-1抗体可以抑制两株胃癌细胞的增殖、迁移,具有明显的抗肿瘤活性。抗NRP-1单克隆抗体可以作为抗肿瘤候选药物。
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