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目的:探讨胆固醇在高脂高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生发展过程中的动态作用。方法:动物水平:100只SD大鼠被随机分为正常饲料(CON)饲喂组、20%脂肪(HFC0)饲喂组、20%脂肪+1%胆固醇(HFC1)饲喂组、20%脂肪+2%胆固醇(HFC2)饲喂组和20%脂肪+5%胆固醇(HFC5)饲喂组,每组20只。分别在饲喂第4周、第6周、第8周和第12周后,每组处死5只大鼠,收集其腹主动脉血浆和肝脏标本;细胞水平:将人源正常肝细胞(HL-7702)采用油酸(OA)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDLC)诱导并随机分为CON组、OA组和OA+LDL-C组,细胞培养5天后构建NASH模型;收集的动物血浆和培养基用于检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性;收集动物肝脏和细胞后检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量;苏木素-伊红(HE)染色法用来观察肝脏的脂肪变性、气球样变性及炎症反应;马松(Masson)三色法染色观察肝脏的纤维组织沉积;肝细胞内脂滴的数量和大小、胆固醇的分布和含量分别用油红O(Oil red o)染色法和菲律宾菌素(Filipin)染色法观察;活性形式的固醇调节元件结合蛋白-2(n-SREBP-2)、低密度脂蛋白受体(LDLR)及3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的表达用Western blot法检测。结果:动物水平:第12周后,HFC2组、HFC5组血浆ALT、AST和肝脏TC、TG含量较CON组明显升高(P<0.05),肝细胞内脂肪变性明显,出现了明显的气球样变性和纤维化病变,HFC2组、HFC5组大鼠NASH诱导成功;Western blot显示,第4周末至第8周末,HFC2组、HFC5组较CON组LDLR含量明显增加(P<0.05),12周末,HFC5组较CON组LDLR含量明显减少(P<0.05);第4周末至第8周末,各组n-SREBP-2的蛋白表达量无显著差异,第12周后,与CON组相比,HFC2组和HFC5组n-SREBP-2蛋白含量明显增加(P<0.05);第4周末、第6周末和第12周末,各组HMGCR含量无明显差异,第8周末,与CON组相比,HFC5组HMGCR蛋白表达明显减少(P<0.05)。细胞水平:OA+LDL-C组较CON组、OA组细胞内胆固醇含量和脂滴含量明显增加,脂滴体积明显增大、n-SREBP-2、HMGCR含量明显增加(P<0.05);OA组、OA+LDL-C组较CON组LDLR含量明显减少(P<0.05)。结论:(1)胆固醇的摄入量和摄入时间的长短与NASH肝损伤成正相关;(2)高脂高胆固醇诱导NASH发生发展过程中,胆固醇可诱导肝细胞高表达LDLR促使胆固醇进入肝脏增加,同时HMGCR调控的内源性胆固醇的合成被抑制;(3)随着肝内胆固醇堆积增多,肝细胞LDLR表达减少,使肝内胆固醇相对不足,反馈性调节n-SREBP-2和HMGCR表达升高,从而使肝脏胆固醇代谢稳态被打破,促进了NASH的发生发展。