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目的:肺癌已经成为威胁人类健康的头号公敌,而其中80%以上为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)。靶向治疗作为一项新的治疗方法,其可靠的疗效及较轻的不良反应,为肺癌的治疗指明了新的方向。研究显示,CASK的过度表达可以明显的抑制细胞的增殖。然而CASK基因与非小细胞肺癌研究甚少。本研究通过本课题组前期构建的、能高效表达人CASK基因的慢病毒载体对H1299细胞系稳定转染,研究H1299细胞在CASK过表达后细胞周期以及凋亡的影响。方法:本课题组前期已构建人钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)基因过表达慢病毒载体。1.细胞培养及CASK过表达慢病毒感染H1299细胞,荧光倒置显微镜下拍照以观察各组细胞状态和感染效率。2.分别将CASK基因过表达慢病毒感染H1299细胞(实验组,即OE组),CON328阴性对照病毒感染H1299细胞(阴性对照组,即NC组),同时设空白对照组(MOCK组)。3.荧光实时定量PCR在mRNA水平检测H1299细胞CASK基因表达的变化4.流式细胞术Annexin-V(APC染色)检测细胞的凋亡情况。5.流式细胞术PI染色法检测细胞周期变化。结果:1.慢病毒感染H1299细胞3天后用荧光倒置显微镜对H1299细胞进行观察,根据绿色荧光蛋白表达情况来确定感染效率,绿色荧光表达率达70%以上为感染合格。结果显示细胞状态良好且感染成功;2.通过荧光定量PCR显示CASK在H1299细胞中表达明显增高,OE组H1299细胞中CASK的表达丰度是NC组的2.852倍(P<0.05);3.CASK基因过表达的H1299细胞与CON328阴性病毒的对照组细胞的凋亡率对比,OE组凋亡细胞百分比为5.89%,NC组凋亡细胞百比为3.72%,CASK基因过表达组细胞凋亡率明显增高(P<0.05),说明过表达CASK基因病毒可促进NSCLC H1299细胞的凋亡;4.细胞周期结果显示:相比NC组和MOCK组,OE组G1期细胞显著增多,而S期和G2/M期细胞显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。说明过表达CASK基因病毒可影响NSCLC H1299细胞的细胞周期进程,CASK过表达时,细胞G1期的比例明显增高,抑制细胞周期G1/S期转换,使其发生G1期阻滞,提示细胞周期转换减缓,细胞进入分裂和DNA合成期的比例减少,最终抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖。结论:CASK基因过表达可以显著促进非小细胞肺癌H1299细胞凋亡,且可延缓NSCLS H1299细胞的细胞周期进程,细胞增殖缓慢,进而抑制肺癌的发展。本研究通过研究过表达CASK基因在人肺癌细胞生物学特性中的功能和作用,初步证实CASK是非小细胞肺癌的候选抑癌基因,为临床分子靶向治疗肺癌提供理论依据。