大肠杆菌双杂交系统是继酵母双杂交系统和哺乳动物细胞双杂交系统之后，产生的另一种直接于细胞内检测蛋白质与蛋白质相互作用的遗传学新方法。本研究希望构建基于转录激活的细菌双杂交系统载体，并且进一步发展高通量的细菌双杂交载体。其主要内容： (1)将细菌双杂交诱饵载体pBT、猎物载体pTRG的克隆方式进行改进。最初的系统是BacterioMatch(R)Ⅱtwohybridsystem，为了能高通量地将诱饵、猎物基因克隆到相应载体上，而且能利用实验室现有的大量引物，将两载体作出了改进：在多克隆位点处两端依次引入现有引物中的长15bp的同源序列BF、NR，两个酶切位点BglⅡ、NotⅠ，中间为一个带强启动子Prrn的gfp作为反选择标记。改进的诱饵载体和猎物载体分别命名为pBT-BN-GFP，pTRG-BN-GFP。 基因片段经PCR扩增后，与用BglⅡ、NotⅠ酶切的诱饵载体混合，无需用连接酶进行连接反应，直接转化大肠杆菌。多基因可以平行操作，无需考虑基因内的酶切位点，定向连接，载体背景低。 (2)利用生物信息分析，选取了代谢、物质转运，氧化应激、信号转导、转录调控和细胞周期调控等肝脏蛋白质相关的35条，将其全长ORF经上述高通量克隆方式克隆到改进的诱饵载体pBT-BN-GFP上，并测序验证命名为pBT-BAIT。(3)GAL4的二聚化区域与Gallp蛋白为蛋白质互作对，验证了此双杂交系统的有效性。 (4)对所克隆的诱饵蛋白进行自激活验证。