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目的:本文旨在从人类脐带基质中分离干细胞,进行体外培养,研究其表型特征和体外向内皮细胞方向分化的潜能。方法:经家属同意取足月健康产妇的新生儿脐带用于本研究。无菌条件下获取脐带,以D-Hank’s平衡盐溶液充分冲洗脐带外周及脐动、静脉管腔,剔除脐动、静脉,将剩余的脐带基质组织切割成约1mm3大小的组织块均匀覆盖于培养瓶,加入DMEM-LG/F12培养基,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中孵育。2～3周左右细胞达到80%～90%融合时,用胰蛋白酶/EDTA(0.25%/0.02%)混合液消化传代。细胞冻存使用含10%二甲基亚砜和90%胎牛血清的冻存液。用细胞生长曲线来说明细胞生长方式。取第3代细胞以流式细胞法行细胞表型鉴定,包括CD34、CD44、CD45、CD54、CD73、CD90、CD105、CD106、CD133以及同型对照抗体。之后将传代培养的细胞按照5×104 /ml的密度重新接种24孔板中,用包括10ng/ml血管内皮生长因子、10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子及10 %胎牛血清的DMEM-LG/F12培养液向内皮细胞方向诱导分化。倒置相差显微镜下每日观察细胞生长形态。应用流式细胞仪于诱导前和诱导后分析、鉴定向内皮细胞诱导分化前后内皮细胞表型CD34、假性血友病因子和血管内皮生长因子受体-2的变化。然后荧光显微镜观察诱导分化后细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白能力以鉴定其功能。最后应用荧光显微镜对诱导分化后的细胞进行摄取乙酰化低密度脂蛋白和表达血管内皮生长因子受体-2的鉴定。结果:在原代培养3～7天后,可见细胞由组织块中游出,并逐渐增多,围绕在组织块周围呈放射状贴壁生长,主要是长梭形的成纤维样细胞,也有扁平状胞质丰富的细胞。2～3周后当细胞达到80%～90%融合时用胰蛋白酶/EDTA(0.25%/0.02%)混合液消化,之后按1:2～1:3的比例接种于新的培养瓶中进行传代,接种后数小时内可见其迅速贴壁。之后细胞生长迅速,3～4天可达80%～90%融合,在低倍显微镜下可见其呈排列紧密的漩涡样结构。细胞生长曲线表明细胞生长方式呈“S”形。流式细胞仪检测证实这些细胞表达通常被认为是间充质干细胞的表型CD105、CD73、CD90、CD54、CD44,而不表达造血细胞及内皮细胞的表型CD34,CD45、CD106和CD133。使用含血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的内皮细胞分化培养液诱导传代后的人类脐带基质来源干细胞向内皮细胞方向分化,3天后可见管腔样结构形成。流式细胞仪分析表明,诱导分化前内皮细胞表型CD34、假性血友病因子和血管内皮生长因子受体-2为阴性,而分化后第14天部分细胞CD34、假性血友病因子和血管内皮生长因子受体-2为阳性。荧光显微镜的分析表明,部分诱导分化后的细胞能够摄取乙酰化低密度脂蛋白,而且能够摄取乙酰化低密度脂蛋白的细胞可以表达血管内皮生长因子受体-2。结论:人类脐带基质来源干细胞在体外能够分离、培养及增殖,使用含血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的培养液,在体外能够将其诱导分化成内皮细胞。