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目的: 子宫内膜只在一个特定的短暂时间内允许胚胎完成种植,我们将这一时期称为“种植窗”期,子宫内膜对胚胎的接受能力被称为子宫内膜容受性。本研究通过测定拟行IVF-ET患者在“种植窗”期的子宫内膜彩色多普勒超声参数和内膜VEGF表达水平,比较上述指标在临床妊娠组和未妊娠组的差异,证明其与妊娠结局的关系,进而阐明它们能否成为评价子宫内膜容受性的临床指标之一。同时通过探讨该时期子宫内膜超声参数与VEGF表达水平间的相互关系,判断其作为评价子宫内膜容受性的超声指标时的可靠性和灵敏度,进一步指导临床工作。 方法: 根据纳入标准和排除标准选取2016-09-01~2017-09-01在苏州大学附属第一医院生殖医学中心接受IVF-ET的350名不孕症患者,其中300名患者因缺少超声检查参数、缺失内膜标本、取消新鲜移植周期等原因被排除本实验,最终仅余50名患者完成本研究的所有实验步骤。在患者IVF-ET的前一周期“种植窗”期收集子宫内膜组织,将收集到的组织置于-80℃冰箱中冷冻保存,以便用于之后进行Real-time PCR实验和Western Blot实验测定该时期子宫内膜VEGF mRNA扩增倍数和VEGF蛋白灰度。在采集内膜组织当日,患者进行内膜采集操作前先进行二维及三维彩色多普勒超声检测,并记录子宫内膜厚度及形态、子宫内膜容积、子宫动脉RI和PI、螺旋动脉血流RI、PI及数量分型、子宫内膜VI、FI及VFI。患者均采用黄体期短效长方案进行超促排卵治疗,并在注射艾泽后36-38h行经阴道取卵术。术后均进行常规IVF授精。所有患者均移植2枚新鲜优质胚胎,并给予黄体支持。于移植后2周检测血清β-HCG,该值阳性且经超声证实宫内早孕者确定为临床妊娠组,β-HCG值阴性或生化妊娠者确定为未妊娠组,经超声证实宫外孕者排除本次研究并嘱其及早治疗。 结果: 1.子宫内膜“种植窗”期,将临床妊娠组和未妊娠组的一般情况进行对比,两组患者在年龄、体重指数(BMI)、不孕原因、基础性激素(LH/FSH/E2/Pg)以及抗苗勒氏因子(AMH)方面均无统计学差异(P>0.05)。 2.子宫内膜“种植窗”期,临床妊娠组和未妊娠组子宫内膜厚度分别为(10.38 ±2.59)mm和(11.28±2.96)mm、子宫动脉血流RI分别为(0.80±0.08)和(0.84±0.08)、子宫动脉血流PI分别为(2.06±0.64)和(2.15±0.56),以及两组子宫内膜形态类型和螺旋动脉数量分型,均无统计学意义(P>0.05)。但该时期临床妊娠组子宫内膜螺旋动脉RI和PI(0.55±0.06,0.83±0.06)小于未妊娠组(0.61±0.07,0.91±0.07),组间差异有统计学意义(P<0.05);临床妊娠组的子宫内膜容积、内膜血流VI、FI和VFI((5.92±0.85,3.42±0.81,23.03±3.38,1.44±0.72)大于未妊娠组(4.43± 0.86,1.59±0.72,19.84±4.70,0.88±0.47),且有统计学差异(P<0.05)。 3.子宫内膜“种植窗”期,RT-PCR实验结果显示临床妊娠组子宫内膜VEGF mRNA的扩增倍数(1.54±0.71)显著高于未妊娠组(0.96±0.54),结果具有统计学意义(P<0.05);Western Blot实验显示临床妊娠组子宫内膜VEGF蛋白灰度(0.74±0.38)高于未妊娠组(0.45±0.27),结果具有统计学意义(P<0.05)。 4.子宫内膜“种植窗”期,子宫内膜血流VI、FI、VFI与VEGF mRNA扩增倍数具有一定线性关系,但子宫螺旋动脉RI、PI及子宫内膜容积与VEGF mRNA扩增倍数呈散在分布。通过Pearson分析可知,该时期子宫内膜VEGF mRNA表达水平与内膜血流VI存在高度正相关性(r=0.741 ,P<0.01 ),与内膜血流FI及VFI均具有一定正相关性(r=0.561,P<0.01;r=0.429,P<0.05)。 5.在 “种植窗”期,子宫内膜各项指标的ROC曲线下面积大小依次为:内膜血流VI>内膜容积>螺旋动脉RI>螺旋动脉PI>内膜血流FI>VEGF mRNA扩增倍数>VEGF蛋白灰度>内膜血流VFI(即:0.949>0.888>0.828>0.826>0.792>0.762>0.742>0.717)。由此可知,在子宫内膜“种植窗”期上述内膜指标对妊娠结局均具有一定预测价值(P<0.01);同时,内膜VI的ROC曲线下面积最大,当截点值为2.556时,其敏感度为88%、特异度为92%,证明其对妊娠结局具有极强灵敏度;而内膜VFI的敏感度相对较弱(68%),内膜VEGF蛋白表达水平则是特异度相对较差(48%)。 结论: 1. 在“种植窗”时期,临床妊娠组的子宫内膜螺旋动脉RI、PI较未妊娠组显著下降,而内膜VI、FI、VFI则显著升高,且上述指标的ROC曲线下面积均大于0.5,表明上述内膜血流灌注指标与妊娠结局息息相关,建议作为子宫内膜容受性评估的常规超声指标之一。 2. 在“种植窗”时期,临床妊娠组子宫内膜VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著高于未妊娠组,表明VEGF有助于提高子宫内膜容受性,对胚胎植入提供帮助。 3. 在“种植窗”时期,通过子宫内膜VEGF表达水平和超声血流灌注指标的相关性分析可知,超声血流灌注指标VI、FI、VFI与内膜VEGF表达水平呈正相关性,且均为妊娠结局的预测指标之一,临床实际应用中可以根据超声参数VI、FI、VFI反映内膜VEGF表达情况,避免使用侵入性VEGF活检评估子宫内膜容受性。 4. 在“种植窗”时期,子宫内膜研究指标中内膜血流VI的ROC曲线下面积最大,且与其他指标相比其灵敏度和特异度均较高,是评价子宫内膜容受性的敏感指标之一。