喷施亚精胺对‘长富2号’苹果花芽成花的影响及多胺氧化酶基因家族的鉴定与分析

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富士苹果成花困难,严重制约苹果产业的发展。已有研究表明,外施多胺(Polyamines,PAs)能诱导花芽形成,且在花芽分化过程中亚精胺(Spermidine,Spd)占主导地位,但还未见有关Spd对苹果成花作用机制的报道。为了研究Spd对苹果开花的影响,于盛花期用1×10-5 mol·L-1 Spd处理7年生的‘长富2号’苹果树;测定喷施后短枝顶芽中内源多胺、内源激素的含量以及与多胺、激素和成花相关基因的表达;于第二年统计的成花率。多胺氧化酶(Polyamine oxidase,PAO)作为多胺氧化途径中的分解酶,参与PA末端分解代谢或反向转化,影响PA稳态并调控植物生长发育。本实验通过系统鉴定苹果PAO家族成员相关生物信息,测定其在不同组织和喷施Spd后PAO基因的表达模式,预测其在PA稳态中可能发生的作用,为深入研究其基因功能提供理论基础。研究结果如下:1. 外源喷施Spd后,在花芽分化后期(60-80 d)显著提高了‘长富2号’苹果短枝顶芽内Put和Spd的含量,而显著降低了内源Spm的含量;也观察到GA3的含量在花芽分化后期(60-80 d)显著降低,ABA的含量显著上升,IAA和ZT含量的变化不显著。此外,在花芽生理分化期,喷施Spd促进了多胺合成基因Md ADC1和Md ODC1的表达;显著提高了GA分解基因Md GA2ox2的表达量,上调了ABA合成基因Md NCED1和Md NCED3的转录水平;促进了成花相关基因Md FD、Md FT和Md SOC1的转录,并显著提高了‘长富2号’的成花率。2. 从苹果基因组中鉴定得到8个苹果PAO基因,分为3个亚家族。发现在同一亚家族中的成员具有相似的基因结构、蛋白结构和蛋白保守基序分布。Md PAO基因启动子还含有多种顺式作用元件,参与苹果的生长发育。GEO数据库表明,8个Md PAO在不同组织器官中均具有明显的表达差异,其中Md PAO4在不同品种和器官中的表达均显著高于其他家族成员。以‘长富2号’苹果为材料,RT-q PCR检测发现Md PAO3、Md PAO4、Md PAO5/6和Md PAO8在花中有较高的表达水平;Md PAO1/2和Md PAO7在茎和果中有较高的表达水平。外源喷施Spd后,除Md PAO3以外,其余Md PAO的转录水平均显著提高。综上,Spd处理促进‘长富2号’开花与多胺、激素途径以及成花相关基因的表达都有紧密联系。并通过生物信息学分析,系统鉴定苹果PAO基因家族的成员,初步探索了其功能特征,为后续研究其更多功能提供基础。
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