拟南芥β-葡糖苷酶19基因启动子的克隆及功能初析

来源 :曲阜师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongmaomi
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在对作物进行抗性改良、产量提高和品质改进时,需要将外源基因转入到特定的作物体内,这些外源基因需要在相应的启动子序列调控下进行表达。由于目前用于遗传改良的植物启动子数量有限,本研究以拟南芥β-葡萄糖苷酶19(Beta-glucosidase,BGLU19)基因启动子为研究对象对其进行活性分析,以期获得适宜作物遗传改良的启动子,满足植物基因工程的需要。  本研究首先对AtBGLU19启动子的序列结构进行分析,预测其中的组织特异性元件和胁迫应答元件。并通过设计特异引物克隆AtBGLU19启动子,构建植物表达载体,利用花序侵染法转化拟南芥并筛选获得转基因纯合植株。最后通过GUS组织化学染色对其活性进行了稳定表达分析,并利用农杆菌侵染烟草对其活性进行了瞬时表达分析。研究结果表明AtBGLU19启动子是一个种子特异性表达启动子,并且可以在异源植物中表达。总之,通过本研究为作物遗传改良提供了一个可供选择的种子高表达启动子,也为后续β-葡萄糖苷酶基因功能研究、基因工程改造植物β-葡萄糖苷酶基因从而获得生产用β-葡萄糖苷酶打下良好的基础。本论文的主要实验结果如下:  1.利用生物信息学方法筛选获得种子特异性表达基因。利用AtGenExpress Visualization Tool和Genevisible Expression Data等在线网站对TAIR网站拟南芥基因表达谱数据进行分析比较,发现AtBGLU19基因在种子中表达量非常高,是一个种子特异性表达基因,因此推测AtBGLU19启动子可能是种子特异性表达启动子。  2.通过手动检索和在线软件PLACE、PlantCARE对AtBGLU19启动子序列进行分析,鉴定出很多与组织特异性表达和胁迫应答相关的顺式作用元件。其中有作用明确且具相关性的三个种子特异性表达调控元件:GCN4元件(TGAGTCA)、AACA元件(AACAAAA)和ACGT元件(GTACGT);以及响应低温、ABA和干旱胁迫的顺式作用元件:四个ABA响应元件ABRE(ACGTACA、CGTACGTGCA和GACACGTGGC)、两个与冷胁迫有关的as-1元件(TGACG)和ACGTCA元件、一个MBS干旱应答元件(TAACTG)。  3.通过设计特异引物扩增AtBGLU19启动子序列。经过PCR扩增后,获得的目的条带回收纯化,通过酶切克隆至表达载体。酶切及测序结果表明成功构建了pBGLU19-GUS植物表达载体。  4.通过农杆菌介导的花序侵染法来获得转基因拟南芥植株,通过PCR扩增和抗生素进行筛选获得转基因拟南芥纯合株系,对纯系植株的种子、叶片、花、荚果等进行GUS染色实验,结果表明AtBGLU19基因启动子在种子中的表达量最高,AtBGLU19启动子是种子特异性表达启动子。  5.利用农杆菌侵染法将植物表达载体pBGLU19-GUS注射到烟草叶片,用瞬时表达的方法验证AtBGLU19基因启动子异源表达情况。GUS组织化学染色结果表明,转入pBGLU19-GUS质粒载体的烟草叶片被X-Gluc溶液染成蓝色,而野生型烟草叶片无染色,表明AtBGLU19基因启动子具有异源表达活性。  6.利用农杆菌介导的叶盘转化法成功获得转基因烟草。
其他文献
  本试验旨在研究橡胶籽饼替代复合植物蛋白源对罗非鱼生长、饲料利用率和血液生化指标的影响,养殖试验8周。配制了5种等氮等能试验饲料,饲料中分别含0、65、130、195和260 g
会议
  本试验旨在研究蚕豆部分替代豆粕对草鱼幼鱼生长、饲料利用率和抗氧化能力的影响.配制5组等氮等能饲料,分别用蚕豆替代0%(FBM0)、15%(FBM 15)、30%(FBM 30)、45%(FBM 45)和60%(
  本实验旨在研究鲈鱼饲料中豆粕蛋白部分替代鱼粉后,补充复合添加剂对鲈鱼生长性能和健康状况的影响.选取初始体重(125.65±0.60g)的军曹为实验对象,配制成粗蛋白45%,粗脂
会议
  为探索发酵蚕蛹作为框鳞镜鲤幼鱼新型蛋白源的可行性,本研究用发酵蚕蛹(FSPM)分别替代配合饲料中0%、25%、50%、75%、100%鱼粉蛋白,制成5种等氮等脂的实用日粮(FM,FSPM25,FSPM
大肠杆菌DH5α是基因工程中最常用的宿主菌之一,但在基本培养基中生长差,对乙酸敏感,难以实现高密度培养。本研究室筛选得到了DH5α的耐乙酸突变菌株DA19和DB15等,在基本培养基中
摘要:独立思考是一种综合能力,它表明个体能面对不同的情景、运用不同的思维方式、方法和技巧解决所面临的问题。要培养学生在化学学习中的独立思考能力,首先必须让学生参与到具体的活动过程中,提高其参与度;然后帮助学生逐渐掌握思维的方法,培养学生的思维品质,形成独立思考的习惯和能力。  关键词:化学学习;独立思考;课堂参与度;思维品质  中图分类号:G633.8 文献标识码:A 文章编号:1992-7711
  本实验旨在研究在低鱼粉饲料中添加蛋白酶对凡纳滨对虾生长性能、免疫力、消化酶和抗病力的影响.选择初始平均体重为0.33±0.02g的健康对虾苗800尾,随机分为5组,每组设4
夏天来了,各地冷饮雪糕与小吃凉皮好卖!有无比雪糕与凉皮更好销的呢?有!现特别推出立竿见影的好项目——台湾卷卷相思冰与四川名吃凉粉凉面!因其口味独特、外观亮丽,每到一地
本论文根据发酵过程优化与放大技术的需要,结合国内外相关的发酵过程在线检测和控制装置技术的最新进展,进行了可控pH摇床、原位细胞显微观察仪、智能精确补料系统等新型装置
  本试验探讨了盐度及饲料脂肪酸模式对凡纳滨对虾脂类代谢的影响.实验选取大小均匀、活力相当的凡纳滨对虾(1.98±0.28g)为实验对象,实验Ⅰ:在不同盐度(3psu、17psu和30psu
会议