近年来对乙型肝炎病毒聚合酶的研究日渐深入,逐渐阐明了其编码基因结构、转录翻译过程,蛋白结构与功能,以及和HBV生活周期的关系。为研究HBV聚合酶的作用机制,更好的理解HBV聚合酶与疾病的发生、发展、转归的关系,探索其血清诊断价值,本实验用PCR方法,从HBV全基因组重组质粒中获得聚合酶的N-末端结构域序列,通过基因工程技术,双酶切后连接至pET32a表达载体,在大肠杆菌BL21工程菌株中表达,通过控制表达条件,最终确定表达程序为：标准转化程序获取的单克隆接种5mL小试管,37℃过夜培养后,1：50稀释接种于250mL锥形瓶中,37℃生长至0D值约为0.8,使用诱导剂IPTG,终浓度为1mM/L,37℃诱导3小时,最终获得抗原可溶性表达。获得大量大肠杆菌菌体,超声破碎,离心后保留上清,透析获得目的蛋白,符合血清学检测试剂盒应用标准。将目的蛋白包被ELISA板,利用酶标技术将辣根过氧化物酶标记抗体,组装成检测试剂盒,对乙肝患者血清进行检测,确定聚合酶的诊断价值。本实验获得了具有抗原活性的目的蛋白,建立了血清学检测方法。通过基因工程技术,表达目的蛋白,为下一步的中试生产做好了技术准备,成本低,效果好,市场化前景广阔。