油樟叶挥发油β-环糊精包合物的研制及其对鸡自然感染大肠杆菌病的疗效观察

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油樟(Cinnamomum longepaniculatum(Gamble) N.Chao),是樟科(Lauraceae)、樟属(Cinnamomum)植物,为中国特有树种。近年来,研究表明油樟叶挥发油具有抑菌、抗炎、抗癌、杀虫等作用,在香料、日化、医药、食品等工业具有广泛的应用前景。但油樟叶挥发油不稳定易挥发,而且具有较强的气味,为了提高油樟叶挥发油的稳定性,掩蔽油樟叶挥发油的气味,本试验研究了油樟叶挥发油β-环糊精包合物的制备工艺,并对其稳定性进行了考察。同时,还观察了油樟叶挥发油p-环糊精包合物对临床上自然感染鸡大肠杆菌病的治疗效果。主要研究结果如下:1.油樟叶挥发油β-环糊精包合物的制备:采用饱和水溶法制备包合物,选择油樟叶挥发油与β-环糊精的配比、包合时间、包合温度和水与包合物的比例4个因素进行L9(34)正交试验,以包合产率和包合率为筛选指标,确定油樟叶挥发油β-环糊精包合物的最佳制备工艺条件。结果表明,最佳制备工艺为油樟叶挥发油与β-环糊精比为1:8(mL:g),包合时间为3h,包合物温度为40℃,β-环糊精和水的比例为1:15(mL:mL)。最佳制备工艺的包合产率为78.59%,包合率为80.00%。2.油樟叶挥发油β-环糊精包合物的表征及稳定性研究:采用红外光谱法和薄层色谱法对油樟叶挥发油β-环糊精包合物进行鉴定。结果显示油樟叶挥发油的特征峰在包合物中已经消失或者明显减弱,而在混合物中仍然存在,表明包合物已经形成;油樟叶挥发油包合前后的层析点一致,表明其包合前后的主要成分基本一致。同时考察了油樟叶挥发油β-环糊精包合物和混合物在强光、高温和高湿环境下的稳定性,结果显示油樟叶挥发油β-环糊精包合物中的相对含油量下降缓慢,混合物中相对含油量下降明显,说明油樟叶挥发油β-环糊精包合物具有一定的抗光照性、热稳定性和湿稳定性,其稳定性优于混合物。3.鸡自然感染大肠杆菌病的诊断:对患病鸡只进行临床诊断和实验室诊断。结果发现该鸡场未曾发生过新城疫、禽霍乱等烈性传染病,鸡舍通风条件差、饲料未经消毒处理;病鸡表现出精神沉郁、运动迟缓、呼吸困难、跛行和排白色或绿色粪便等症状;剖检见心包充满黄色透明液体,肝脏黄染,十二指肠充气严重,卵黄吸收不全。结合流行病学调查、临床症状观察和剖检结果,初步怀疑鸡感染了大肠杆菌或沙门氏菌,或者为混合感染。为进一步鉴定,进行了实验室诊断。病料涂片镜检可见两端钝圆的革兰氏阴性短杆菌;培养基鉴定结果为在麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上分别长出桃红色菌落和带金属光泽的绿色菌落,符合大肠杆菌生长特性:将从病死鸡体内分离培养的细菌进行生化鉴定,结果该菌能水解淀粉和油脂,发酵葡萄糖和乳糖,甲基红试验和吲哚试验为阳性,符合大肠杆菌的生化特性;最后经过动物试验,确定分离出的细菌具有致病性。因此,根据临床诊断和实验室诊断结果可知该鸡场发生了大肠杆菌病。4.油樟叶挥发油p-环糊精包合物对鸡自然感染大肠杆菌病的疗效观察:将确诊为大肠杆菌病的5日龄鸡随机分成5组,每组30只。Ⅰ组为未治疗组,Ⅱ组在饲料中添加1%磺胺间甲氧嘧啶,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别在饲料中添加7.2%、6%、4.8%油樟叶挥发油β-环糊精包合物。给药治疗时间为10d,采取拌料方式给药,并给予各组相同的饮水、光照等饲养环境。通过记录临床症状变化、死亡率和病理组织观察,对油樟叶挥发油β-环糊精包合物的疗效进行初步评估。结果显示:未治疗组死亡率为76.67%,1%磺胺间甲氧嘧啶组死亡率为53.33%,7.2%、6%、4.8%油樟叶挥发油β-环糊精包合物组死亡率分别为43.33%、56.67%、63.33%。根据临床症状、死亡率和病理组织观察,显示未治疗组的鸡只感染大肠杆菌病严重,而经治疗的鸡只死亡率下降、症状减轻或痊愈,病情得到有效控制。结果表明:饲料中添加适量的油樟叶挥发油β-环糊精包合物对鸡大肠杆菌病具有不同程度的疗效,其中7.2%油樟叶挥发油p-环糊精包合物组的治疗效果最明显。
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