目的:本研究在前期工作的基础上,拟通过观察断藤益母汤对RAW264.7巨噬细胞诱导的破骨细胞分化、增殖及功能的影响,揭示断藤益母汤抑制破骨细胞分化及其功能的分子机制,从而为临床上应用断藤益母汤治疗类风湿关节炎提供实验依据,并有助于进一步推广断藤益母汤的应用,让更多的病人获益。方法:实验一:建立RAW264.7巨噬细胞诱生破骨样细胞模型,设立空白组,模型组,DTYMT400mg·L^-1、600mg·L^-1、800mg·L^-1、1000mg·L^-1浓度组和甲氨蝶呤2mg·L^-1组,制备断藤益母汤冻干粉,并对各组进行相应干预。实验二:通过TRAP染色对破骨细胞进行鉴定,探讨断藤益母汤对破骨细胞分化的影响。实验三:通过CCK-8法检测各组细胞生存率,探讨断藤益母汤对破骨细胞增殖的影响。实验四:通过蛋白免疫印迹法检测Wnt和RANKL信号通路关键蛋白表达,探讨断藤益母汤对破骨细胞的分子通路作用机制。实验五:通过ELISA检测MMP-9炎症因子水平,探讨断藤益母汤对炎症因子的影响。结果:实验一、二TRAP染色试验显示,与模型组相比,DTYMT400mg·L-1、600mg·L-1浓度组的融合细胞数量有所减少,但差异无统计学差异（P>0.05）;DTYMT800mg·L-1、1000mg·L-1浓度组融合细胞数目显著减少,具有统计学意义（P<0.01）,提示当断藤益母汤浓度达到一定水平后,可以有效抑制OC的分化。实验三CCK8结果显示,与模型组比较,DTYMT600mg·L-1、800mg·L-1、1000mg·L-1浓度组和甲氨蝶呤2mg·L-1组生存率明显下降（P<0.05,P<0.01）,提示一定浓度的断藤益母汤可以明显抑制OC的增殖。实验四免疫印迹结果显示,与模型组相比,DTYMT1000mg·L-1组、甲氨蝶呤2mg·L-1组中RANKL蛋白表达量有所下降（P<0.05）。DTYMT各组中的OPG蛋白表达水平无明显上升或下降（P>0.05）;DTYMT800ug/ml、1000ug/ml浓度组、甲氨蝶呤2ug/ml组中Wnt3a、β-catenin蛋白表达量显著上升,DKK1蛋白表达水平显著下降,提示一定浓度的DTYMT可以有效降低RANKL表达水平,增加Wnt3a、β-catenin蛋白表达和下调DKK1表达。实验五ELISA结果显示,与模型组相比,DTYMD600mg·L-1、800mg·L-1、1000mg·L-1浓度组及甲氨蝶呤组中的MMP-9表达水平均有所下降,且DTYMT浓度越高,下降越明显,提示DTYMT能显著降低MMP-9的表达水平。结论:1.当断藤益母汤药物浓度达到800ug/ml、1000ug/ml时,可以有效抑制OC的分化。2.当断藤益母汤药物浓度达到600ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml时,对破骨细胞的增殖具有抑制效果,且药物浓度越高,抑制效果越明显。3.当断藤益母汤药物浓度达到800ug/ml、1000ug/ml时,可以增加Wnt3a、β-catenin蛋白表达和下调DKK1表达。当断藤益母汤药物浓度达到1000mg·L-1时,可以有效降低RANKL表达水平。断藤益母汤各浓度组对OPG蛋白的表达无明显影响。4.断藤益母汤药物浓度达到600mg·L-1、800mg·L-1、1000mg·L-1时,能显著降低MMP-9的表达水平。