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具有良好抗肿瘤活性的稀有人参皂苷Rg3和Rg5在人参药材中含量极低,难以从药材中直接获取。目前主要从红参中提取或通过对原人参二醇型人参皂苷(Protopanaxadiol,PPD)进行化学或酶转化获取。本论文将集成化扩张床与高速逆流色谱结合,通过集成化扩张床将人参中的PPD提取至溶液中,在提取的同时将其转化为稀有人参皂苷Rg3和Rg5,并通过扩张床进行吸附、分离,最后采用高速逆流色谱对目标产物进一步纯化。 首先对PPD进行水解研究,通过对酸种类、水解时间、水解温度等条件的优化,确定PPD的最佳水解条件为:0.8mol/L的D,L-酒石酸溶液,在60℃下水解3小时。以此为基础,建立了直接从人参药材中提取转化稀有人参皂苷的方法。 搭建了人参皂苷的集成化扩张床原位提取、转化和分离装置。通过考察提取溶剂、扩张率、上样流速、洗脱剂醇浓度、洗脱流速、洗脱体积等因素,建立了集成化获取方法。最终确定的方法为:提取溶剂为含0.8mol/L酒石酸的10%乙醇水溶液、超声提取温度为60℃、大孔树脂吸附时间及提取转化时间均为3h、扩张率为1.6、提取溶剂流速为0.3BV/h,梯度洗脱,先用3BV的去离子水,后用3BV的30%乙醇溶液以1.7BV/h的流速清洗杂质,最后分别用2BV的70%和90%的乙醇溶液分别以1.3BV/h和1.9BV/h的流速分别洗脱目标化合物Rg3和Rg5。分离所得的产物中,Rg3和Rg5的纯度分别为14.6%和11.9%,回收率为47.5%和34.2%。 最后,采用高速逆流色谱对扩张床洗脱的产物进一步纯化,以二氯甲烷∶甲醇∶异丙醇∶水(5∶4∶1∶3,v/v/v/v)作为溶剂系统,优化了逆流色谱仪转速、流动相流速等参数。最终所得Rg3和Rg5的纯度分别为85.6%和83.3%。 本文提出的人参皂苷提取、转化和分离方法,不仅适用于稀有人参皂苷Rg3和Rg5的获取,也为其它微量中药有效成分的转化制备提供了一条思路。