论文部分内容阅读
隐孢子虫(Crycolosporidium)是一种专一的、寄生于胞内的寄生原虫,寄生于人和动物的胃肠道。能够引起严重的腹泻。食源性隐孢子虫病有明显的季节性,春季、夏季为易发季节。其传播途径非常广泛,可以以水源、食物、空气为介质进行传播,还能通过直接接触等途径传播,但是通过空气传播的报道非常少,通过以水源为介质传播的报道非常多,其在灌溉用水中被发现,是公认的世界范围内的水源性传播的病原体。食源性暴发的报道也非常多,1976年第一次有记录的人类感染隐孢子虫病暴发。此后很多国家相继报道该病的暴发。目前全球6大洲至少80个国家,300多个地区报道了隐孢子虫病。近十几年来已经报道了多起食源性隐孢子虫病的暴发。隐孢子虫对人类健康造成了威胁,并且造成了不必要的经济损失。检测蔬菜表面的隐孢子虫卵囊,阻止其传播可以减免其造成的危害。Cook、Palmer和Joan等先后建立了水果、蔬菜表面检测隐孢子虫的方法。这些方法是基于4个基本阶段:从蔬菜中提取出卵囊;浓集并分离卵囊;使分离出的卵囊可视化;卵囊能在显微镜下识别。为了了解郑州开封两地患者肠道寄生虫感染情况,2012年7月4日至2012年8月31日期间,在郑州河南省人民医院,开封解放军第155医院和淮河医院采集的共2698份样品。采用卢戈氏碘染色法和饱和蔗糖漂浮法对所有样品进行了检查。共发现了5种肠道寄生虫,分别是环孢子虫、贾第虫、阿米巴原虫、线虫和钩虫。寄生虫阳性粪便样品29例,肠道总感染率为1.07%(29/2698)。其中环孢子虫和贾第虫感染率并列最高,均为0.4%(11/2698),其次为阿米巴原虫肠道感染,感染率为0.19%(5/2698),线虫和钩虫,感染率都为0.04%(1/2698)。此次调查没有发现混合感染,也没有发现隐孢子虫。为了建立一种能检测蔬菜表面隐孢子虫的方法,用不同数量梯度的隐孢子虫卵囊对蔬菜进行接种,分别设置为5×101个、5×102个、5×103个、5×104个;再对蔬菜进行洗脱,采用不同的洗涤剂,分别为Alconox洗洁精、雕牌洗洁精、立白洗洁精、白猫洗洁精和去离子水;对卵囊的收集,采用反复离心收集沉淀法;被接种的蔬菜的用量也被加以对比,最后基于隐孢子虫18S rRNA基因位点对洗脱后的卵囊进行PCR扩增,建立了一个系统的检测方法。结果表明用50g西葫芦、15g生菜时,卵囊最小洗脱量均为5×101个;洗脱时间10min和20min结果无明显差异;接种12h和接种24h结果无明显差异;不同洗涤剂(Alconox洗洁精、雕牌洗洁精、立白洗洁精、白猫洗洁精、去离子水)洗脱结果无明显差异。成功建立一种能够检测农产品表面污染隐孢子虫卵囊的检测技术,为进一步开展病原溯源研究提供了技术支持。