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原发性肝癌(Primary Hepatic Carcinoma,PHC)是原发于肝细胞或肝内胆管细胞的恶性肿瘤。在我国其发病率,仅次于胃癌、食道癌。目前,原发性肝癌的高发病率、高死亡率及其逐年增高的趋势,己成为一个极其严重的国际卫生问题。临床以肝区疼痛、乏力、食欲差、腹胀、消瘦、发热、黄疸等症状,以AFP、CEA、GGT、ALP等异常为特点。原发性肝癌是临床常见的恶性肿瘤。该病早期不易被发现,患者可无症状,患者中后期病情发展迅速,恶性程度高,容易发生多脏器转移,治疗难度加大,肝癌晚期患者自然生存期缩短等特点。原发性肝癌发病比例男女为2-5:1,临床确诊病例多为中晚期患者,如不及时医治,生存期不超半年。中医学中“肝积、积聚、癥瘕、黄疸、鼓胀、岩、痞气”等病归属现代医学肝癌范畴,应用中医药治疗原发性肝癌能够有效防治其术后复发或转移,能提高患者免疫力,能够改善中晚期患者生存质量、延长患者生命等多方面具有优势,为目前综合性治疗原发性肝癌治疗手段的重要组成部分。1.目的本课题采用小鼠癌株传代等复合造模方法,制备原发性肝癌小鼠动物模型。通过小鼠肝、脾指数,肝脏病理改变及免疫组化,基因表达等作为观察指标。研究化癥散积颗粒对原发性肝癌小鼠模型的干预作用,深入探讨其抗癌机理。为临床治疗原发性肝癌提供理论依据的同时,也为开发高疗效、高质量、高标准的抗癌中药制剂奠定基础。2.方法制备移植型H22肝癌动物模型,将动物模型随机分为模型组、斑蝥组及化癥散积颗粒低、中、高剂量5组。化癥散积颗粒低、中、高剂量组给药量分别为1.95g/kg,3.9g/kg和7.8g/kg;斑蝥组给药剂量为0.19g/kg;模型组给予等量无菌生理盐水。连续给药、给水14天,末次给药24小时后,摘眼球取血,处死模型小鼠,剥离肿瘤,检测肝、脾指数,并将肿瘤组织切片,经HE染色、TUNEL、免疫组化、RT-PCR等方法,检测IL-2、Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3基因以及表达水平,以初步探讨化癥散积颗粒对肝癌的干预机理。3.结果实验结果显示:①化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组肝、脾指数与模型组相比有显著差异(P<0.01);②化癥散积颗粒中、高剂量及斑蝥组白细胞介素2(IL-2)表达明显高于模型组(P<0.05);③HE染色结果:化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组与模型组比较肿瘤灶减小,且与正常组织边界较清楚。④TUNEL染色检测结果:化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组与模型组相比具有显著性差异(P<0.01, n=5))⑤免疫组化结果:化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组与模型组比较Caspase-9、Caspase-3、Bax有强阳性表达,相反Bcl-2却有弱阳性或阴性表达。⑥RT-PCR检测组织中Bcl-2和Bax的mRNA表达结果发现,肿瘤组织中的Bcl-2 mRNA水平在化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组明显低于模型组(P<0.05),Bax mRNA水平则明显高于模型组;化癥散积颗粒低剂量组Bcl-2 mRNA与模型组相比稍低,Bax mRNA水平与模型组相比稍高,但无统计学差异(P>0.05)。⑦Western-blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达可见,化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组中Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达明显高于模型组(P<0.05)。相反,Bcl-2蛋白明显低于模型组(P<0.05)。4.结论化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组可有效抑制原位肝癌模型小鼠肿瘤生长,诱导肝癌细胞发生凋亡。化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组诱导肝癌细胞发生凋亡可能是通过增强免疫,抑制Bcl-2基因表达,同时增加Bax表达,继而激活Caspase-9,使Caspase-9活化片段增多,最终激活凋亡效应蛋白Caspase-3,从而引发一系列凋亡级联反应。