目的:(1)临床试验部分通过比较慢性萎缩性胃炎患者治疗前后的病理分型变化及生存质量变化,以明确健脾清热活血法中药胃萎清颗粒对CAG患者的临床疗效。(2)动物实验部分通过运用健脾清热活血法使用代表方药(胃萎清)对CAG大鼠进行干预研究,探讨健脾清热活血法治疗萎缩性胃炎的作用机制。通过对慢性萎缩性胃炎模型大鼠的整体情况、胃黏膜病理形态学变化、胃黏膜的TNF-α、IKK和p50等相关指标的观察,探讨胃黏膜萎缩-癌变过程与炎症信号通路的关系,为研究中医药的疗效机制提供理论基础。方法:(1)临床试验部分经过多中心研究,本临床试验共搜集78例患者,随机分为胃萎清组42例,叶酸组36例。其中2例胃萎清组患者脱落,总共76例患者参与数据分析。叶酸有4例患者拒绝复查胃镜,故未纳入病理疗效比较。治疗前后评价患者病理组织学检查、胃镜下表现及脾胃系疾病之慢性胃炎患者报告结局量表,从而评估患者的镜下表现及生存质量情况。(2)动物实验部分本研究购入94只SPF级SD健康雄性大鼠,适应性喂养1周后,随机分为空白对照组和CAG模型组。其中空白对照组14只,CAG模型组80只。该实验空白对照组给予正常饮食、自由饮水,直至整个实验结束。CAG模型组则予浓度为180μg/mL的MNNG饮用液自由饮用,并在此基础上采用经典的饥饱失常法复制脾虚证(即喂食1天,禁食1天,如此循环),连续造模至第14周,随机抽取模型组中的两只CAG大鼠,进行胃黏膜病理形态组织学检查,结果显示两只大鼠胃粘膜病理组织学均为胃黏膜固有腺体萎缩伴肠上皮化生。确定造模成功后开始给药,将CAG模型组随机分为5组:模型组,胃萎清高剂量组,胃萎清中剂量组,胃萎清低剂量组及叶酸组。其中模型组14只,胃萎清高剂量组、中剂量组、低剂量组及叶酸组均分别为16只,正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水。第15周开始灌胃,胃萎清高、中、低剂量组给药浓度(生药量)分别为15.6g/kg、7.8g/kg、3.9g/kg。叶酸组第15周开始按1.46mg/kg/d给予叶酸灌胃。灌胃容积为10ml/kg,每日1次,连续灌胃10周。实验过程中,每2周给各组大鼠测量一次体重,以观察体重变化情况。选用电镜、Real-time PCR及Western blot等方法检测各组大鼠胃黏膜病理变化及NF-κB炎症信号通路中的TNF-α、IKK、p50等指标变化情况。结果:(1)临床试验部分两组患者在年龄、性别、文化程度等基线方面的比较,无明显差异性,两组患者的基线一致,可进行治疗前后统计比较分析。病理分型变化方面。入组前病理分型方面,入组前两组患者全部均存在萎缩及慢性炎症情况;肠化方面,两组经卡方检验,P>0.05,差异无统计学意义;异型增生方面,两组经卡方检验,P>0.05,差异无统计学意义;活动性方面,由于部分参数数值较小,采用Fisher’s确切概率法,双侧检验P>0.05,差异无统计学意义。因此可认为治疗前,两组基线一致,病理分型具有可比性。两组患者经治疗后,病理分型前后比较。萎缩方面,胃萎清组及叶酸组治疗后改善率分别为65%及62.50%,两组均可有效改善患者胃黏膜的萎缩,两组改善萎缩方面疗效,经卡方检验,P>0.05,差异无统计学意义。肠化方面,胃萎清组及叶酸组治疗后改善率分别为36.67%及31.82%,两组对胃黏膜的肠化方面有一定程度的改善。异型增生方面,两组治疗前与治疗后异型增生的例数无变化,提示治疗组与对照组对胃黏膜异型增生无明显改善作用。慢性炎症方面,胃萎清组及叶酸组治疗后改善率分别为25%及18.75%,胃萎清组对胃黏膜的慢性炎症方面有一定的改善。两组相互比较,由于部分参数数值较小,采用Fisher’s确切概率法,双侧检验P>0.05,差异无统计学意义。活动性方面,胃萎清组及叶酸组治疗后例数分别为10例及8例,治疗前后比较提示胃萎清组及叶酸组对胃黏膜的活动性方面均无明显改善。因此,可认为胃萎清及叶酸均可改善胃黏膜的萎缩情况,而对肠化方面有一定的改善效果,而对异型增生、慢性炎症及活动性方面无明显改善作用。胃萎清组及叶酸组患者治疗前生存质量得分比较,无明显差异,具有可比性。两组治疗后生存质量得分比较,提示两组比较有统计学意义,经胃萎清组治疗后患者的生存质量优于叶酸组治疗后患者。其主要改善方面体现在精神形色、消化功能等方面。经统计分析后,在生存质量方面,胃萎清组患者治疗前后生存质量对比,有统计学意义,提示胃萎清组患者治疗后生存质量较治疗前好。除了量表总得分方面,改善的领域及方面包括:生理领域各个方面、独立性领域以及心理领域方面。提示胃萎清在改善患者的精神状态方面、消化功能方面有较好的疗效。具体体现在疲倦感的缓解、精神面色的改善、消化功能的好转(嗳气、胃脘胀闷、胃脘痛等症状的改善)等,而对患者独立性方面、心理方面以及社会领域方面的改善不明显。叶酸组患者治疗前后生存质量总得分对比,无明显差异,提示叶酸组患者治疗后生存质量无明显改善。在生理领域的消化功能方面,叶酸组患者治疗前后得分比较,提示叶酸在改善患者消化功能方面有一定的疗效。治疗前、后量表余各领域及方面的生存质量得分进行比较,均无明显差异,无统计学意义。(2)动物实验部分根据病理检查,病理组织学显示MNNG合饥饱失常萎缩性胃炎造模法于实验第14周时造模成功。将成功造模的大鼠随机分为五组,其中模型组14只,胃萎清高剂量组、胃萎清中剂量组、胃萎清低剂量组及叶酸组分别为16只。一般情况方面,造模组大鼠体重明显轻于空白组,两组比较有显著差异;造模组大鼠造模阶段的体重增长值也明显低于空白组,两组比较有显著差异。病理形态学方面,胃萎清能一定程度上改善CAG大鼠的胃黏膜病理情况,延缓萎缩性胃炎时所伴有的肠上皮化生或异型增生等的发展;胃萎清能改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃粘膜大体状况,通过改善胃粘膜腺上皮主细胞及壁细胞的超微结构,从而影响其胃酸及胃蛋白酶的分泌,起到一定的治疗作用。蛋白表达方面,胃萎清能使TNF-α、IKK的表达降低,胃萎清高剂量组能使p50的表达下调,从而起到控制CAG的发展。结论:临床试验表明,胃萎清可以改善患者胃黏膜病理组织学。从观察病例分析判断,该方可在一定程度上改善胃黏膜萎缩、肠化生等的作用。通过与代表西药叶酸组的对比,胃萎清能够明显改善患者的临床症状及生存质量。健脾清热活血法代表方胃萎清可有效改善CAG大鼠的整体情况,改善大鼠胃黏膜的病理组织学及超微结构,其作用机制可能为:通过抑制NF-κB信号转导通路的致炎因子,使其蛋白低表达,从而阻断细胞信号转导通路的异常激活,从而达到防治CAG的目的。健脾清热活血法可能通过抑制信号通路的致炎因子的异常激活,进而发挥抑制其下游的基因突变,并激活抑癌基因高表达的作用。但信号通路下游靶基因众多,而且也接受上游多条通路的信号转导,且信号通路之间存在对话,彼此之间并非一一对应,因此,健脾清热活血法对CAG干预的具体机制仍需进一步探索。