论文部分内容阅读
背景:胶质瘤是最常见的原发性颅内恶性肿瘤。其中,胶质母细胞瘤约占所有胶质瘤的54%,约占高级别胶质瘤的60-70%。Ⅰ-Ⅱ级的胶质瘤患者生存时间为5-10年,间变性星形细胞瘤患者生存时间为2-3年,而胶质母细胞瘤患者的生存时间则只有12-15个月,5年生存率更是低至3%。虽然胶质瘤治疗的方式众多,包括常规的手术切除、放疗、化疗和近来年新出现的免疫疗法、电场疗法等,但是胶质瘤的治疗效果仍然不佳,过去几十年的研究仅仅使患者的中位生存时间延长了几个月。胶质瘤一直是中枢神经系统肿瘤研究的重点、热点和难点。目的:通过收集胶质瘤病人组织标本,运用Western Blot检测TBC1D15蛋白在胶质瘤组织标本中的表达,了解其在正常脑组织和胶质瘤中的差异表达,进一步观察TBC1D15蛋白对U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响以及探讨潜在的作用机制。方法:1、收集青岛大学附属医院神经外科2018年12月-2019年4月期间手术切除的胶质瘤组织标本24例和正常脑组织5例,通过Western Blot检测TBC1D15的蛋白表达情况;2、干扰效率检测:利用siRNA干扰技术,敲低U87细胞系中TBC1D15的表达,并运用Western Blot检测siRNA干扰效率;3、增殖检测:运用TBC1D15-siRNA和Control-siRNA转染U87细胞,用CCK8检测TBC1D15-siRNA组和Control-siRNA组胶质瘤细胞24h、48h、72h的增殖情况;4、凋亡检测:运用TBC1D15-siRNA和Control-siRNA转染U87细胞,流式细胞仪检测TBC1D15-siRNA组和Control-siRNA组胶质瘤细胞的凋亡情况;5、Wnt/β-catenin通路检测:运用TBC1D15-siRNA和Control-siRNA转染U87细胞,提取细胞蛋白,用Western Blot检测TBC1D15-siRNA组和Control-siRNA组U87胶质瘤细胞中β-catenin的表达。结果:1、Western Blot检测肿瘤组织标本和正常脑组织标本中TBC1D15蛋白表达量,显示胶质瘤组织中TBC1D15蛋白的表达量明显高于正常脑组织(P<0.05),且胶质瘤组织中TBC1D15蛋白表达量与其WHO分级相关。2、CCK8检测U87胶质瘤细胞的增殖,显示TBC1D15-siRNA组U87胶质瘤细胞的增殖能力明显低于Control-siRNA组(P<0.05)。3、细胞流式检测U87胶质瘤细胞的凋亡,显示TBC1D15-siRNA组U87胶质瘤细胞的凋亡率明显高于Control-siRNA组(P<0.05)。4、Western Blot检测β-catenin的表达,显示TBC1D15-siRNA组U87胶质瘤细胞中的β-catenin表达量明显低于Control-siRNA组(P<0.05)。结论:TBC1D15蛋白在脑胶质瘤组织中的表达量较正常脑组织升高明显,并且其表达量与肿瘤WHO分级呈正相关,即胶质瘤WHO分级越高,TBC1D15蛋白的表达量越高。通过siRNA转染技术降低U87胶质瘤细胞中TBC1D15的表达,可以抑制胶质瘤细胞的增殖和促进胶质瘤细胞的凋亡,其作用机制可能是抑制WNT/β-catenin信号通路的激活。