番木瓜蛋白酶IV基因的克隆/序列分析及其在植物抗病毒中应用可行性的研究

来源 :中国农业科学院生物技术研究所 | 被引量 : 4次 | 上传用户:parisjiang
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木瓜青果乳汁中含有丰富的半胱氨酸类蛋白酶,据已知的研究结果,该研究尝试从未成熟的木瓜果的总RNA中克隆木瓜蛋白酶基因,虽然在RT-PCR时使用引物的是根据木瓜蛋白酶的CDNA序列而设计的,但却得到了与之有67﹪同源性的番木瓜蛋白酶IV的cDNA序列,对其分析表明,该序列与EMBL database中X78056同一段基因序列相比较同源性达98.7﹪.将番木瓜蛋白酶IV的cDNA序列以全长、去除信号肽部分和成熟酶部分分别连接到细菌表达载体中,表达结果表明,只有含去除信号肽部分cDNA载体才能检测到相应的表达的蛋白条带.而含有成熟酶基因的载体导致细菌宿主缓慢生长.该研究试图利用番木瓜蛋白酶IV的酶解活性,探索一条新的抗病毒途径.利用上述表达载体转化烟草,NC89,获得卡那霉素抗性植株,选取一定数目的卡那霉素抗性植株,经PCR和Dot-blotting检测证实了基因的整合.接种马铃署Y病毒,未发现有理想效果的抗病毒植株,对可能的原因进行了分析.
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