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目的：1.设计并构建小鼠NMDA受体NR2B亚基短发卡RNA干扰真核表达载体(GRIN2B shRNA)并鉴定。2.通过鞘内转染聚乙烯亚胺(PEI)介导的GRIN2B shRNA干扰质粒,研究该干扰质粒对小鼠NR2B基因表达的影响,探讨GRIN2B shRNA干扰质粒用于慢性疼痛治疗的可行性。方法：1.根据NMDA受体NR2B亚基mRNA编码序列,设计并合成针对NR2B亚基的特异性RNA干涉片断,将其克隆入pYr-1.1质粒载体,构建NR2B亚基shRNA真核表达载体pYr-1.1-GRIN2B-shRNA,并对其进行酶切和测序鉴定。2.选用成年雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为4组：正常组、生理盐水组、阴性对照组和PEI-shRNA组。于鞘内注射后第7天在小鼠足底皮下注射50μL1%的福尔马林后对其进行疼痛行为学观察,并且取小鼠腰段脊髓分别行RT-PCR、Western Blot检测及免疫组化分析,观察小鼠脊髓NR2B mRNA、蛋白的表达水平及定位。结果：1.酶切和测序结果均证明NMDA受体NR2B亚基短发卡RNA已经插入到质粒载体pYr-1.1里。2.疼痛行为学观察显示：福尔马林所致的Ⅰ相期(急性期)的伤害性反应,在各组中均无差别(p>0.05)；与正常组、生理盐水(NS)组、阴性对照(Scr)组相比,PEI-shRNA组Ⅱ相期(强直期)的伤害性反应显著减少(p<0.05),而正常组、生理盐水组和阴性对照组比较,无显著性差异(p>0.05)。3.PCR及Western Blot检测小鼠脊髓NR2B mRNA及蛋白的表达显示：与正常组、NS组和Scr组相比,PEI-shRNA组小鼠L4-6段脊髓的NR2B mRNA及蛋白表达水平明显降低(p<0.05),而正常组、生NS组和Scr组比较,无显著性差异(p>0.05)。4.免疫组化结果显示：NR2B主要在小鼠L4-6段脊髓背角浅层表达；与正常组、NS组和Scr组相比,PEI-shRNA组小鼠L4-6段脊髓NR2B阳性的细胞数明显减少(p<0.05),而正常组、NS组和Scr组比较,无显著性差异(p>0.05)。结论：1. pYr-1.1-GRIN2B-shRNA干扰质粒构建成功,为后续NR2B作为镇痛靶点的基因治疗奠定了基础。2.PEI介导的GRIN2B shRNA干扰质粒能够使小鼠脊髓NR2B的表达明显下调。3.PEI介导的GRIN2B shRNA干扰质粒能够减轻福尔马林引起的Ⅱ相炎性痛,进一步证明NR2B在疼痛的维持与中枢敏化中起重要作用,为疼痛治疗提供了新的方法和思路。