附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊蛋白Semenogelin 1相互关系研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:michael_lv
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EPPIN(SPINLW1;Gene ID:57119)基因是一种在附睾和睾丸组织中特异性双表达并编码含胱氨酸残基丰富的蛋白质的单拷贝基因。其基因结构中含有KUNITZE和WAP两种特点的基因类型,有含四个二硫腱为核心的类似于蛋白激酶抑制剂样结构为特点的基因序列。本研究用六种不同的实验方法表明排精后的精浆中和在精子表面,精子表面的EPPIN结合来自于精囊的凝胶蛋白SEMENOGELIN1:1)用抗EPPIN的多克隆抗体从提取出的人类精子表面蛋白和精浆蛋白中行免疫沉淀法可沉淀出精囊蛋白Semenogelinl;2)用荧光标记的抗Eppin和抗Semenogelinl的抗体行免疫定位法显示Eppin和Semenogelin两者在精子表面共同定位;3)体外重组EPPIN及重组Semenogelinl蛋白质共同孵育,用抗Eppin或抗Semenogelinl的抗体行免疫共沉淀法,可沉降相应的结合蛋白;4)用重组Eppin和重组Semenogelinl进行Far-western印迹法证实两者相互作用;5)放射性碘125标记的重组Semenogelinl能饱和性结合重组Eppin,无放射性标记的Semenogelinl可与之竞争性地结合,反之亦然;6)放射性碘125标记的重组Semenogelin能直接与印迹膜上的重组Eppin结合的放射自显影法。所有这些方法从体内和体外都表明Eppin结合Semenogelinl。为了进一步研究Eppin和Semenogelinl结合的特异性,制作重组Eppin和重组Semenogelinl的不同氨基酸片段,发现C端Eppin75-133氨基酸片段与Sg164-283氨基酸片段结合,这段Semenogelinl片段中含有人类Semenogelinl中唯一的胱氨酸残基(Cys239)。还原化或羧甲基化后的胱氨酸残基失去与放射性碘125标记的重组Eppin的结合能力,表明
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