hIGF-1对同种异体兔软骨细胞与脱细胞软骨基质共培养影响的实验研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangzu03
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[目 的]探究脱细胞软骨基质(ACM)作为天然细胞支架的可行性及人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)对软骨细胞与脱细胞软骨基质材料共培养的作用影响。[方法]取新鲜兔耳膝关节软骨提取软骨细胞并进行原代培养,取第3代细胞备用,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光对细胞进行鉴定。取兔耳软骨进行脱细胞处理,将获得的脱细胞软骨基质材料进行HE染色、Masson染色、扫描电镜及孔隙率检测,并且用CCK-8分别检测25%、50%、100%浓度的多孔支架浸提液的毒性。将软骨细胞接种至脱细胞软骨基质中,实验组加入57.14μg/L的人胰岛素样生长因子1,对照组添加相同量含10%小牛血清的DMEM培养基,连续培养7 d,培养结束后于电镜下观察软骨细胞在脱细胞软骨基质材料上的增殖及黏附情况。[结 果]1)脱细胞软骨基质支架具有松散的多孔结构和一定的抗压强度。电镜下孔径(3.48±1.39)μ m,孔隙率(90.13±2.52)%。2)细胞毒性实验结果示软骨细胞分别在25%、50%、100%浓度的脱细胞软骨基质多孔支架浸提液中分别培养24 h、48 h、72 h的细胞增殖率较阴性对照组无统计学差异(P>0.05)。3)实验组软骨细胞增殖旺盛,其大量贴附于脱细胞软骨基质周围,软骨细胞进入支架材料的陷凹内,大量细胞伸出伪足,相互连接,占据绝大部分支架空穴。而对照组软骨细胞增殖较实验组缓慢,且大量细胞成簇聚集在多孔材料表面,仅有少量细胞进入支架材料空穴内。[结论]实验制备的脱细胞软骨基质材料具有无毒、良好细胞粘附性的特点,是一种可靠的修复软骨缺损的天然细胞支架。且人胰岛素样生长因子1能促进软骨细胞在脱细胞软骨基质材料上的增殖及黏附。
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