蓝细菌Anabaena sp.PCC 7120中SrpA对细胞形态影响和铜离子调控petE启动子的机制研究

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丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)超家族在真核生物中被广泛研究,但是该家族成员在蓝细菌中的研究非常少。在蓝细菌.Anabaena sp.PCC7120中的找到了一个编码丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白的基因(all0778),命名为srpA。srpA在大肠杆菌DH5a中表达会显著改变细胞形状,推测SrpA可能是.Anabaena sp.PCC7120中一种参与细胞形态的蛋白。srpA基因的缺失会引起细胞细胞形状的改变,一些细胞从圆柱形变成圆形并且形成卷曲的丝状体。这个现象在平板培养基上更容易被观察到。srpA缺失突变体细胞更加耐受溶菌酶处理和更高渗透压溶液(比如水)的处理。在大肠杆菌和Anabaena sp.PCC7120中进行了不同的实验寻找和SrpA相互作用的蛋白。通过酵母双杂交实验我们寻找到了若干蛋白。其中编码N一乙酰胞壁酰一L一丙氨酸酰胺酶的基因hcwB(alr,0092)在所有蓝细菌中都存在。HcwB的功能是水解在正常细胞生长和分裂过程中都需要的细胞壁肽聚糖成分。荧光定量PCR试验证明在srpA缺失突变体中hcwB的的转录水平在减氮条件下显著上升,而在野生型细胞中只有较少的增加。蓝细菌中的N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶可能改变细胞渗透压。  PetE启动子在二十多年的研究工作中被用作一种调控基因转录水平的工具得到了广泛使用,特别是在蓝细菌Anabaena sp.PCC7120的基因功能研究中。但是关于其中的依赖铜离子的调控机制所知甚少。petE基因编码一种重要的铜离子蛋白质体蓝素。petE基因的表达在很多蓝细菌中受细胞铜离子浓度调控。大肠杆菌中的二元信号转导系统cusRS参与铜离子相关调控。在蓝细菌中可能存在类似大肠杆菌的铜离子调控机制。在Anabaena sp.PCC7120中我们找到了若干类似大肠杆菌cusRS二元信号转导系统的编码基因,根据BLASTP确定的和cLasRS的相似性我们选择了其中5对基因构建了缺失突变体。这些缺失突变体的生长速率在我们的实验条件下比野生型略低。我们对pesE基因在野生型和cusRS-like缺失突变体不同铜离子浓度下的转录水平和基因表达中可能的铜离子调控机制进行了研究和讨论。
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