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黑色素瘤是具有高侵袭性的恶性肿瘤。其发病率和死亡率相对较高。黑色素瘤的驱动基因主要包括:TERT（＞90%）、BRAF（＞50%）、p16INK4A（40%）、NRAS（21%）、PTEN、TP53和ARID2等。其中端粒酶逆转录酶（TERT）一度被认为是极具潜力的检测治疗靶点。超过约74%的黑色素瘤患者都被发现携带TERT启动子突变。TERT启动子突变主要集中在起始密码子上游124 bp和146bp处,并且这两个突变在功能上是互斥的。TERT-124或者TERT 146发生突变时,产生的ETS结合基序“GGAA”能够与ETS1、GABPA和GABPB1结合并促进TERT转录,激活端粒酶,延长端粒进而促进细胞生长。A375是一种非常典型的携带TERT-146突变（C＞T）的高侵袭性黑色素瘤细胞系。TERT-146突变赋予A375快速增殖能力和高侵袭能力,其主要通过两种途径实现这一过程:一是TERT-146突变产生新的ETS家族结合基序“GGAA”,ETS家族成员与“GGAA”结合以激活和催化TERT转录;二是TERT-146突变能够抑制细胞凋亡。TERT-124回复突变已被证明能够抑制恶性胶质瘤的生长,但是其具体机制还不清楚。因此,明确TERT启动子回复突变对黑色素瘤细胞生长的影响和作用机制显得十分重要。首先,我们利用NG-ABEmax系统回复了A375(A375-146T/T)中的TERT-146突变（T＞C）。得到了A375-146T/C和A375-146C/C细胞系。RT-q PCR和Western Blot试验结果显示,在回复突变后,与对照组相比,TERT转录和蛋白质表达下调;同时,ETS家族包括ETS1、GABPA和GABPB1的表达下调。为了排除脱靶导致的ETS家族表达下调,我们检测了预测的12个脱靶位点和GABPA编码区全序列。测序结果显示,在TERT-146回复突变细胞系中没有发现脱靶,在GABPA编码区也没有发现突变。Q-TRAP和端粒长度检测结果显示,与A375细胞相比,TERT-146回复突变细胞的端粒活性明显下降、端粒长度显著缩短。此外,在培养过程中我们发现,与A375相比TERT-146回复突变细胞的增殖能力较弱且形态发生显著的改变,暗示了这些细胞可能发生了凋亡或者坏死。为了明确TERT-146回复突变对黑色素瘤生长的影响。我们测定了A375-146T/T、A375-146T/C和A375-146C/C体外的增殖、迁移和侵袭能力,试验结果显示,与对照组相比,TERT-146回复突变细胞系增殖、迁移和侵袭能力降低,特别是纯合子A375-146C/C在培养48 h后几乎没有增殖,同时几乎没有迁移和侵袭性。随后,我们将A375和A375-146C/C细胞移植到裸鼠皮下,荷瘤试验结果显示,与对照组相比A375-146C/C细胞不能或只能形成很小的肿瘤,并且在裸鼠的其他组织和器官中未发现肿瘤转移。接下来,我们进一步检测了TERT-146回复突变细胞中的细胞凋亡。发现在TERT-146回复突变细胞系中凋亡“开关”B细胞淋巴癌-2（Bcl-2）蛋白表达下调并且出现DNA损伤。随后,我们通过流式细胞技术检测了TERT-146回复细胞系的凋亡情况,结果显示在TERT-146回复细胞系中发现了早期和晚期凋亡。然后我们检测了Wnt/β-Catenin信号通路,结果显示TERT-146回复突变并不影响Wnt/β-Catenin信号通路。最后我们将目光锁定在Bcl-2、VDAC、Caspase 9和细胞色素C等组成的内源性细胞凋亡上。通过大量的Western Blot试验我们发现,TERT-146回复突变抑制Bcl-2的表达,上调了促凋亡蛋白Bcl相关X蛋白（Bax）、Caspase 9和细胞色素c等的表达。Bax和VDAC在线粒体膜上聚集并形成通道。细胞色素c通过线粒体膜通道释放到细胞质中激活了Caspase 9酶原。最终由Caspase 9介导内源性细胞凋亡的发生。综上所述,在这项研究中,我们以黑色素瘤细胞系A375为载体,通过TERT-146回复突变确定了TERT-146回复突变可以抑制黑色素瘤在体外的增殖、迁移和侵袭,以及在体内的生长。并且,我们通过流式细胞技术、DNA损伤检测和内源性凋亡相关蛋白检测,确定了TERT-146回复突变抑制黑色素瘤细胞生长的具体机制:解除了突变TERT对内源性凋亡的抑制,诱导Bcl-2/Bax介导的内源性凋亡的发生及发展。这些数据阐明了TERT启动子回复突变与细胞凋亡之间的关系,也暗示了TERT-146可能是黑色素瘤的一个因果突变。该研究为TERT启动子回复突变与细胞凋亡的关系提供了新的认识,为高侵袭性黑色素瘤潜在的基因治疗提供有力的理论基础,为线粒体凋亡机制提供了理想的补充。