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第一部分含笑内酯的抗炎活性及保护小鼠急性腹膜炎的作用和机制研究 [目的]以金黄色葡萄球菌（S.aureus）为代表的革兰氏阳性菌（G+菌）感染导致的败血症是重症监护病房治疗中的一大难题。从调控宿主免疫反应着手，降低对病原菌感染产生的过强的免疫反应，避免系统性炎症反应综合症，可能会是治疗败血症的新方向。本课题在G+菌感染的免疫细胞模型中，研究来源于我国传统中药台湾含笑的中药单体含笑内酯(MCL)的免疫调控作用和其分子机制。在S.aureus感染的小鼠急性腹膜炎模型中，探究含笑内酯的体内抗炎作用和机体保护作用。 [方法](1)建立PGN模拟革兰氏阳性菌感染的巨噬细胞模型，用不同浓度的MCL分别作用小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞、小鼠原代腹腔巨噬细胞以及骨髓诱导分化的树突状细胞，不同时间点以后，qRT-PCR检测细胞内各炎性细胞因子mRNA的表达情况;ELISA检测细胞培养上清中各炎症相关细胞因子的分泌情况。(2)用Western blot方法检测MCL调控PGN诱导的小鼠原代腹腔巨噬细胞的信号通路活化情况（包括ERK/JNK/p38 MAPKs，NF-κB和PI3K/Akt信号通路中关键信号蛋白的磷酸化检测）。(3)腹腔注射S.aureus诱导小鼠急性腹膜炎模型，并进行药物MCL的干预，以磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)为阴性对照，以临床抗休克用药地塞米松(dexamethasone，DXM)为阳性对照，检测血清中的炎性细胞因子表达情况;并摘取小鼠肝、肾两个脏器，固定切片以后，用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，H＆E）染色，观察MCL对肝、肾的保护作用。(4)腹腔注射致死剂量的S.aureus制造小鼠感染性休克模型，并进行药物MCL的干预（以PBS为阴性对照，以临床抗休克用药DXM为阳性对照），进行存活期观察。 [结果]MCL通过下调PI3K/Akt和NF-κB信号通路，抑制小鼠巨噬细胞、小鼠树突状细胞和人单核细胞细胞系THP-1中PGN诱导的炎症反应。同样也明显降低S.aureus感染引起的急性腹膜炎小鼠血清中炎症因子的分泌，并保护小鼠免受MRSA感染引起的肝、肾损伤，降低致死剂量S.aureus引起的死亡率。 [结论]MCL能够通过调控PGN、S.aureus和MRSA诱导的炎症反应，降低过度的炎症反应导致的机体损伤，维持机体的免疫平衡状态。因此，在革兰氏阳性菌（例如S.aureus）和耐药菌（例如MRSA）感染导致的败血症治疗中可能是一个新的抗炎和免疫抑制候选药物。后续工作将进一步探索MCL和临床常用抗生素的协同治疗效果。 第二部分盐酸麻黄碱基于ERK和PI3K/Akt信号通路调控流感病毒诱导的炎症反应研究 [目的]流感病毒高度易变，导致人群免疫力降低，爆发区域性甚至全球性流感疫情的威胁始终存在。因为病毒变异导致的耐药问题近几年也日趋严重，流感病毒感染激活免疫细胞产生过度的炎症反应，加剧机体组织脏器的损伤，甚至导致死亡。研发新型抗流感药物、拓展新型治疗策略变得日益紧迫。本课题组通过针对流感治疗有效经方“麻杏石甘汤”等复方中筛选数十种中药单体和化合物，发现来自麻黄的主要活性成分—盐酸麻黄碱(ephedrine hydrochloride，EH)能够明显调控巨噬细胞中病毒模拟物咪喹莫特(imiquimod，R837)诱导的炎症反应。本课题拟从EH调控机体的免疫反应和EH抑制流感病毒的复制等方面研究其抗流感的作用。 [方法](1)建立咪喹莫特(R837)模拟流感病毒感染的巨噬细胞模型，用不同浓度的EH分别作用小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞、小鼠原代腹腔巨噬细胞，不同时间点以后，qRT-PCR检测细胞内各炎性细胞因子mRNA的表达情况;ELISA检测细胞培养上清中各炎症相关细胞因子的分泌情况。(2)用Western blot方法检测EH调控R837诱导的小鼠原代腹腔巨噬细胞的信号通路活化情况（包括ERK/JNK/p38 MAPKs，NF-κB和PI3K/Akt信号通路中关键信号蛋白的磷酸化检测）。(3)用季节性甲型流感病毒(seasonal H1N1，sH1N1)感染人肺癌细胞株A549，建立流感病毒感染的细胞模型，并分别用不同浓度的EH作用于病毒感染的细胞，不同时间点以后，qRT-PCR检测细胞内流感病毒sH1N1的主要抗原血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的表达情况，并检测A549中各炎性细胞因子mRNA的表达情况。 [结果]EH通过抑制R837诱导的ERK活化和上调PI3K/Akt/GSK-3β的活化，抑制促炎性细胞因子的表达和促进抑炎性IL-10的表达。在季节性甲型流感病毒(sH1N1)感染的人肺癌细胞株A549中，也能够明显调控sH1N1感染过程中炎性因子的表达，并能够抑制A549细胞中sH1N1的复制繁殖。 [结论]EH不仅能够抑制单链RNA模拟物R837和季节性甲型流感病毒sH1N1诱导的炎症反应，还能明显抑制sH1N1在人肺癌细胞株A549中的复制繁殖。因此，EH有可能成为抗流感病毒的候选药物。