【摘 要】
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Dkk1是Wnt信号途径的一个抑制蛋白,在胚胎发育中诱导头颈发育,Dkk1和noggin在头部组织形成中相互协调。HeLa cells中表达的Dkk1可显著抑制其在软琼脂中的生长;在其它肿瘤中,D
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Dkk1是Wnt信号途径的一个抑制蛋白,在胚胎发育中诱导头颈发育,Dkk1和noggin在头部组织形成中相互协调。HeLa cells中表达的Dkk1可显著抑制其在软琼脂中的生长;在其它肿瘤中,Dkk1表达水平的降低或Dkk1分子本身的缺陷促进了肿瘤的发生。这些提示Dkk1可能是肿瘤生长的抑制因子。在人胶质母细胞瘤细胞U87MG中没有检测到Dkk1的表达。通过Dkk1基因转染U87MG,使外源Dkk1在U87MG细胞中等水平表达,肿瘤细胞没有任何形态学改变,但在ceramide(神经酰胺)处理后出现显著凋亡,故hDkk1基因可能是一个促凋亡基因;Dkk1可能通过调节对肿瘤细胞生长有控制作用的Wnt和p53信号途径作用而促进肿瘤细胞凋亡。有实验表明Dkk1是由肿瘤抑制基因p53诱导表达的,其可拮抗Wnt途径来增强p53对肿瘤生长的抑制作用;Dkk1基因启动子上有多个β-catenin/TCF4位点,用Wnt1激活经典的Wnt信号途径或表达有活性的β-catenin,TCF4或LRP6突变体可诱导人Dkk1基因的转录。在多数肿瘤细胞中诱导Dkk1表达可下调Wnt/β-catenin途径的作用。在结肠肿瘤细胞中Dkk1表达缺失;外源表达的Dkk1可能抑制结肠肿瘤生长。因此,本项目考察Dkk1是否具有抗结肠癌作用和可能机制。第一部分:从Mouse Embryo 9 dpc,DH10B cDNA文库中筛选出来Dkk1基因,经测序确认后用T-A克隆的方法克隆入pGM-T;然后亚克隆
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