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蜱是专性吸血的外寄生虫,是传播多种人和动物疾病的第二大生物媒介,给人类健康和畜牧业带来极大危害。蜱的防控是近年国内外关注的焦点和研究热点。蜱对化学药物存在抗药性和环境污染等缺陷,新型抗蜱制剂具有广泛的应用前景。青海血蜱是仅在我国分布并传播多种病原,对畜牧业造成严重危害的蜱种之一。蜱叮咬宿主传播病原的过程中存在大量液体运输活动。水通道蛋白(AQPs)是广泛存在生物体细胞膜上一类专性介导液体跨膜转运的重要功能蛋白,已证明在液体运输中发挥关键作用,可能作为研究蜱疫苗的关键蛋白之一,但蜱体内AQPs研究甚少,生物学功能也不清楚。本研究根据NCBI数据库公布的6种蜱AQPs的基因序列设计兼并引物,以青海血蜱cDNA为模板,利用RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)方法,扩增获得青海血蜱AQPs的部分序列;在此基础上设计5’和3’RACE(rapid-amplification of cDNA ends)引物,运用RT-PCR和RACE方法扩增青海血蜱AQPs全长序列,经分析获得青海血蜱AQPs 4种转录异构体。生物信息学分析显示,获得的青海血蜱AQPs 4种转录异构体的氨基酸顺序只在3,末端存在差异,其余部分氨基酸顺序一致,均有6个跨膜区,无信号肽序列,疏水性较强;进化分析显示青海血蜱AQPs 4种转录异构体与Rhipicephalus appendiculatus,Rhipicephalus sanguineus的AQPs序列同源性较高(82%),初步说明获得的青海血蜱AQPs 4种转录异构体是正确的。根据上述获得的青海血蜱AQPs 4种转录异构体的基因序列,设计引物扩增保守区。将目的片段连接表达载体pET-28a(+),经PCR、双酶切及测序验证正确后,体外无细胞进行表达并纯化,SDS-PAGE及Western-blot方法验证了蛋白的正确表达;同时将AQPs蛋白的3个外模区域合成多肽,并用多肽制备相应的多克隆抗体。以上研究结果显示,青海血蜱AQPs基因存在转录异构体,对转录异构体相同片段进行无细胞表达并纯化,并利用合成的多肽制备相应多克隆抗体,为新型抗蜱药物或疫苗的研制提供了一定的基础,对揭示蜱体内液体运输机制和蜱防治具有重要意义。