化瘀通痹方在淋巴细胞共培养中抑制滑膜细胞炎性增殖的机制研究

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目的探讨化瘀通痹方对T细胞的增殖和分化和滑膜细胞炎性增殖的影响,阐明化瘀通痹方发挥作用的效应机制,为气、血、毒病因病机理论在中医药防治类风湿关节炎提供实验依据。方法大鼠滑膜细胞株(RSC-364)及大鼠脾脏淋巴细胞以Transwell模式共培养,IL-1β为炎症刺激因子,化瘀通痹方水提冻干粉为干预药物,IL-1β受体拮抗剂为阳性对照药,分别刺激12、24h后收集Transwell上下室细胞;通过HE染色观察RSC-364细胞形态变化;流式细胞术检测RSC-364细胞凋亡率及T淋巴细胞增殖及分化情况;Western Blot检测RSC-364细胞中NF-κB和JAK/STAT信号通路关键细胞因子表达情况,以及T淋巴细胞中NF-κB通路关键细胞因子和Th细胞特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-yt的表达情况。结果与正常组相比,模型组RSC-364细胞HE染色后,细胞出现明显呈不规则形态改变,且胞质呈不同程度损伤;模型组RSC-364细胞凋亡率在干预24h后有所下降;模型组 RSC-364 细胞 NF-κB 通路关键细胞因子 TRAF2、MyD88、p-IKKα/β、NF-κBp50和JAK/STAT信号通路关键细胞因子JAK1、p-STAT3均显著增高;CD4+IFN-γ+Th1细胞与CD4+IL-17+Th1 7细胞比率均呈不同程度上升,CD4+IL-4+Th2细胞比率下降明显;且Th细胞特异性转录因子T-bet、ROR-γt均出现显著升高、12h GATA-3表达下降;淋巴细胞中NF-κB通路关键细胞因子TRAF2、p-IKKα/β、NF-κBp50表达均呈上升趋势,证明大鼠炎症细胞模型诱导成功。与模型组相比,各药物干预组RSC-364凋亡率均有升高;各药物干预组RSC-364 NF-κB通路关键细胞因子TRAF2、MyD88、p-IKKα/β、NF-κBp50和JAK/STAT通路关键细胞因子JAK1、p-STAT3均降低;各药物组淋巴细胞CD4+IFN-γ+Th1细胞比率明显降低,干预24h后的CD4+IL-17+Th17细胞比率显著降低;干预后12h CD4+IL-4+Th2细胞比率明显升高;CD4+CD25+Treg细胞比率以化瘀通痹方25μg/ml组升高最为明显;Ths细胞特异性转录因子T-bet、ROR-yt均出现显著降低,GATA-3表达明显升高;淋巴细胞NF-κB通路关键细胞因子TRAF2、p-IKKα/β、NF-κBp50表达均呈降低,以干预24h最为明显。结论IL-1β可诱导并成功建立大鼠滑膜细胞炎性增殖模型,诱导T淋巴细胞增殖的分化,激活滑膜细胞及T淋巴细胞NF-κB信号通路通路与滑膜细胞JAK/STAT信号通路。化瘀通痹方可能通过恢复T淋巴细胞免疫平衡,调控滑膜细胞NF-κB和JAK/STAT信号通路的激活和功能,抑制滑膜细胞炎性增殖及免疫损伤。
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