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人类MHC Ⅰ类链相关基因A(MICA)是位于MHC-Ⅰ类区域的非经典HLA-Ⅰ类基因家族成员,具有高度多态性。该基因可在多种上皮肿瘤细胞表面表达,并可被Vδ1 γδ T细胞所识别。本论文旨在研究固相化的重组MICA分子(rMICA)诱导卵巢上皮肿瘤(OEC)和结肠上皮肿瘤(CC)组织中Vδ1 γδ T细胞的体外扩增反应,并进一步探讨MICA反应性Vδ1 γδ T细胞对上皮来源的肿瘤细胞细胞毒作用。由于Vδ1 γδ T细胞可在MHC非限制性和无需抗原处理与呈递的条件下识别表达在肿瘤细胞表面的MICA,因此,该种简捷的识别应答可能会开辟肿瘤过继免疫治疗的新途径。本研究将为这一肿瘤的过继免疫治疗新策略建立基础,并为MICA反应性Vδ1 γδ T细胞作为肿瘤过继免疫治疗的新型候选效应细胞提供实验依据。 首先,我们从卵巢癌细胞系SKOV3中提取总RNA,通过RT-PCR克隆了MICA的全长cDNA。利用pET原核表达系统表达了含有MICA全长或胞外结构域(α1-α3)的融合蛋白MICA*008,并成功地进行了纯化。同时,真核表达载体瞬时转染Daudi细胞也获得了成功。这些系统的建立为后续的研究奠定了基础。 其次利用原核表达的重组MICA*008蛋白制备了系列的特异性抗MICA单克隆抗体1F10,2D10,3E8,4D2和5G11以及家兔多抗血清。通过ELISA、间接免疫荧光和Western-blot对抗体进行了特异性鉴定。利用流式细胞仪分析表明单抗3E8和5G11可识别表达在HeLa细胞表面的MICA分子天然构象。抗—MICA抗体的获得为进一步的研究提供了有力的工具。