ATP生物荧光法对DUWLs微生物污染的监测研究及过氧化氢纳米银离子干预效果评价牙科综合治疗台(dental comprehensive unit, DCU)是口腔诊疗中不可或缺的主要设备之一,其水路系统(dental unit waterlines, DUWLs)由一套狭窄而复杂的细孔塑料软管相互连接而成,功能亦相对复杂,主要有在诊疗过程中为牙科手机和活髓牙治疗提供冷却水、为三用枪提供冲洗水,给患者提供漱口水、为痰盂提供冲洗水等。文献显示,口腔综合治疗台水路存在严重的微生物污染,菌落总数可高达106cfu/ml,多种病原微生物如铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、大肠杆菌、阿米巴、真菌等以浮游菌和生物膜的形式存在于DUWLs中,可随手机转动时喷出的水雾及三用枪用水进入患者口中,成为牙科诊疗交叉感染的潜在危险因素。半个多世纪以来,关于DUWLs微生物污染的问题己日益受到重视,然而仍有不少问题待研究,目前亟待解决的问题有：1.口腔科用水的监测,我国目前尚无相关规范规定其监测内容、方法、频率及标准,多由医院自行制定,但资料显示,为数不少的专科医院和基层诊所尚未将其纳入日常监测的范围,管理上存在盲区。2.水路管理方案的制定,尽管文献报道应用于DUWLs处理的方法有很多,但能够达到良好效果并普及应用的尚无定论。不同方案各有优劣,难以同时满足水路管理方案的综合要求：抗菌有效、成本较低、节省人力、对环境、器械及人体无害。因此,本研究针对上述两个问题,拟开展牙科综合治疗台水路污染监测与控制的相关研究,为临床提供参考。目的：1.探讨ATP生物荧光法用于DUWLs微生物污染监测的可行性,寻找对DUWLs微生物污染简便易行的动态监测方法。2.评价一种新型的消毒剂过氧化氢纳米银离子对DUWLs微生物污染的干预效果和生物安全性,寻找抗菌有效,成本较低,相对安全的干预方法。3.通过一种新型牙科综合治疗台独立储水罐的设计,希望在较低的成本前提下,便捷地实现罐内消毒液体的定量定时抽取,实时动态且节省人力的消毒功能。方法：1)实验一：对18台牙科综合治疗台54个采样点共采集108份水样,其中牙科手机、三用枪和漱口出水口处水样各36份,同时采用传统菌落培养计数法和ATP生物荧光采样检测法两种监测方法同时进行细菌含量的监测,评价ATP荧光技术用于监测不同程度水路污染的可行性。2)实验二：通过菌落计数法对大型三甲专科医院DUWLs不同部位采样点的细菌含量进行基线监测,激光共聚焦显微镜和扫描电镜观测DUWLs内壁生物膜的形态和结构,细菌分析仪分析水路中的致病菌构成,了解DUWLs的污染现状和污染控制难点。并比较比较四种不同的消毒剂：0.2%过氧化氢纳米银离子消毒剂(Sanosil)、5.25%次氯酸钠消毒剂(NaClO)、3%过氧化氢消毒剂(H202)对DUWLs和0.2%的洗必泰(Chlorhexidine, CHX)对DUWLs进行周期性消毒,研究过氧化氢纳米银离子对水路的消毒效果及对生物膜结构的影响。3)实验三：通过cck-8法研究四种不同的消毒剂：过氧化氢纳米银离子消毒剂(Sanosil)、次氯酸钠消毒剂(NaClO)、过氧化氢消毒剂(H202)和洗必泰(Chlorhexidine, CHX)在不同浓度时在体外对人口腔黏膜上皮细胞作用2小时和24小时的细胞毒性,比较不同消毒剂使用的生物安全性。4)实验四：通过一种新型牙科综合治疗台独立储水罐的设计,在较低的成本前提下,便捷地实现罐内消毒液体的定量定时抽取,从而可能实现对DUWLs实时动态的消毒功能。结果：1)实验一：ATP生物荧光法监测结果与菌落计数法比较具有显著正相关(R=0.719,P<0.01),通过ATP荧光法判定水路中的细菌含量是否合格与菌落计数法比较具有高度一致性(Kappa值=0.833),灵敏度=88.9%,特异度=94.4%。2)实验二：①实验中未对DUWLs进行定期消毒的DCU中存在严重的污染,其平均菌落数为4.015*103 cfu/ml,共发现12种条件致病菌,以革兰阴性菌为主,在水管内壁观测到厚薄不均,相互连接聚集呈片状、条索状或网状,混杂大量球菌和杆菌的生物膜。②四种化学消毒剂均可有效降低水路中细菌含量和杀灭条件致病菌,但过氧化氢纳米银离子的消毒持续时间长于其它组,激光共聚焦显微镜观测显示对生物膜的破坏效果：过氧化氢纳米银离子>次氯酸钠>双氧水>洗必泰。3)实验三：四种消毒剂中在常用的消毒浓度下与人口腔上皮黏膜细胞作用一定时间下均可产生细胞毒性,但0.2%过氧化氢纳米银离子消毒剂和0.2%的洗必泰毒性等级为中度毒性(2级),5.25%次氯酸钠和3%过氧化氢毒性等级为重度毒性(4级)。4)实验四：通过一种牙科综合治疗台的独立储水罐的设计,要点包括罐体、可拆卸式定量取液组件。定量取液组件包括外罩、取液泵、电动推杆、定量容液罐,取液泵和电动推杆。所述外罩采用筒形塑料制成,外罩的顶部设有连接治疗台的上螺纹口,外罩的底部设有连接罐体的下螺纹口；取液泵包括取液罐,取液罐内由下至上依次设有下阀门、活塞、上阀门、推拉杆和连杆；采用可拆卸式设计,安装拆卸方便,在拆卸下即使不使用定量抽取功能,也不影响正常的取液使用。该种牙科综合治疗台的独立储水罐,可在较低的成本前提下,便捷地实现对罐内液体的定量抽取,实现对牙科综合治疗台实时动态的消毒功能。结论：1)生物荧光检测法和传统菌落计数法在水路污染的监测中具有高度一致性。ATP生物荧光技术可作为牙科综合治疗台水路污染监测的一种快速简便的初筛方法。2)本研究发现过氧化氢纳米银离子不仅可以有效的减少水路中的菌落总数,并且对生物膜结构的破坏优于其他对照组,更适合与DULWs这种复杂结构的消毒。3)不同消毒剂在体外的细胞毒性不同,过氧化氢纳米银离子和洗必泰水路污染控制的常用浓度上对细胞的毒性低于次氯酸钠和过氧化氢,相对安全。