【摘 要】
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果蝇依赖于多种先天免疫反应来适应复杂的外界环境,主要包括体液免疫和细胞免疫。体液免疫是通过肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition proteins,PGRPs）识别不同的病原菌细胞壁表面不同类型的肽聚糖（peptidoglycan,PGN）,激活体内体液免疫系统产生抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）清除病原物。体液免疫过程中,果蝇的脂肪体是
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果蝇依赖于多种先天免疫反应来适应复杂的外界环境,主要包括体液免疫和细胞免疫。体液免疫是通过肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition proteins,PGRPs）识别不同的病原菌细胞壁表面不同类型的肽聚糖（peptidoglycan,PGN）,激活体内体液免疫系统产生抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）清除病原物。体液免疫过程中,果蝇的脂肪体是重要的体液免疫器官之一。细胞免疫主要包括黑化反应,吞噬作用等去保证果蝇正常生命活动的进行。感染果蝇通常使用肠道感染法和系统感染法。本文采用穿刺系统感染的筛选方法,激活果蝇的体液免疫系统。通过记录通过RNAi敲低不同基因的果蝇被感染后的死亡率,快速高效地筛选出一些与免疫有关的新基因。从400多个基因的筛选数据中我们发现在果蝇脂肪体内敲低合成胞苷二磷酸二酰甘油合成酶基因（cytidine diphosphate-diacylglycerol synthetase,CdsA）后,感染革兰氏阴性菌胡萝卜果胶杆菌Pectinobacterium carotovora15（Ecc15）和革兰氏阳性菌粪肠球菌Enterococcus faecalis（E.faecalis）的死亡率较野生型对照组高。CdsA是合成磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol,PG）和磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol,PI）过程中非常重要的基因,同时也可以将磷脂酸（phosphatidic acid,PA）从合成甘油三酯（triacylglyceride,TAG）转向合成磷脂。利用qPCR技术研究发现:（1）通过突变Imd通路中的转录因子Relish,干扰Imd通路后感染Ecc15会抑制脂肪体内CdsA基因的表达,所以脂肪体内的CdsA的正常表达需要Relish;（2）脂肪体内干扰CdsA的表达后感染Ecc15,死亡率升高,抗菌肽基因Diptericin（Dpt）的表达水平下降;（3）干扰脂肪体CdsA表达后,果蝇被E.faecalis感染死亡率升高,但抗菌肽基因Drosomycin（Drs）表达量却正常,推测死亡率升高并不是由于Toll通路的激活受到影响,有可能是磷脂合成不足导致细胞膜合成受损引起的现象。合成磷脂过程中生成的PA也是合成TAG过程中一个重要的部分,所以本课题进一步探究了TAG是否在果蝇天然免疫中起作用。用Ecc15和E.faecalis感染相关品系果蝇,结果发现在脂肪体中抑制TAG的合成以及过表达相应的脂肪分解酶去分解TAG导致果蝇品系在感染E.faecalis后生存率降低,但是抗菌肽基因Drs表达水平与对照组相比并无明显变化。后续通过油红染色法分析,TAG可能帮助果蝇自身的先天性免疫系统去抵抗病原菌的侵害。综上所述,本课题通过果蝇遗传筛选发现并初步研究了脂质代谢在果蝇先天性免疫中的作用,为今后理解脂质代谢与动物先天免疫的关系打下了基础。
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