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研究背景随着临床上广谱抗生素的广泛使用,细菌耐药现象也日益严重。铜绿假单胞菌(PA)感染的发病率、病死率仍处于较高水平,铜绿假单胞菌对超广谱抗生素的敏感性不断在下降。铜绿假单胞菌的耐药机制非常复杂,主要包括灭活酶的产生、药物作用靶位的改变、外膜通透性的降低及药物流出泵的主动外排等。多药耐药成了铜绿假单胞菌感染的一个严重的问题,近年来更是出现了对除了多粘菌素外的所有抗假单胞菌的抗生素同时耐药的菌株,即泛耐药铜绿假单胞菌。除多粘菌素外目前市面上有售的抗生素对其完全无效,患者一旦感染,往往使临床医师束手无策,病死率极高,造成极其严重的临床后果。中药在抑制细菌耐药方面取得了不少成果,主要是在单味药和中药单体的研究上较多,中药复方在抑制细菌耐药性作用的体内和体外实验研究也有相关文献报道。根据临床观察,耐药菌感染与中医伏邪温病致病相吻合。治疗伏邪温病,不可过用苦寒,当以清透为主,据此建立了清透法(新加达原散)联合抗生素治疗耐药菌感染,在临床中取得良好效果。因此提出基于伏邪温病理论的清透法可以抑制/逆转细菌耐药这一假说。目的探讨清透法(新加达原散)抑制/逆转细菌耐药的作用。方法应用血清药理学方法制备清透法(新加达原散)含药血清,模拟中药口服吸收后的实际成分。实验一采用含药血清混合肉汤培养基培养铜绿假单胞菌ATCC27853,同时以低浓度左氧氟沙星诱导铜绿假单胞菌耐药,对照组采用空白大鼠血清处理,同时设立不含血清的单纯抗生素诱导组以除外血清本身的作用。随后进行传代培养,观察每一代细菌生长及出现耐药的情况,直至某一组产生细菌耐药现象,纸片法测定三组细菌耐药情况的差异,并测量每组的MIC值。实验二采用含药血清混合肉汤培养基培养耐药铜绿假单胞菌25029,对照组采用空白大鼠血清处理,同时设立不含血清的单纯诱导组以除外血清本身的作用。随后进行传代培养,观察每一代细菌生长及耐药性改变的情况,直至某一组产生细菌耐药明显逆转现象,纸片法测定三组细菌耐药逆转情况的差异并测定每组的MTC值结果体外诱导耐药实验,含药血清组出现耐药的时间较空白血清组和空白对照组晚,具有统计学差异(P<0.01)。体外逆转耐药实验,耐左氧氟沙星的铜绿假单胞菌25029存含药血清干预作用下经传代培养,至第9代时左氧氟沙星药敏纸片对其的抑菌圈直径为(15.37+0.58)mm,按CLST标准判读已恢复至中介水平,较空白血清组和空白对照组有明显变化(P<0.01)。传代至第12代以后,铜绿假单胞菌25029对左氧氟沙星保持持续敏感(抑菌圈直径>17.00mm)。结论清透法(新加达原散)含药血清体外可以延缓或抑制铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药性的产生；对于耐左氧氟沙星的铜绿假单胞菌,清透法(新加达原散)含药血清干预了其耐药性,使其对左氧氟沙星逐渐恢复敏感,从而改变了共耐药性。