【摘 要】
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目的探讨血卟啉衍生物作为光敏剂介导的间质光动力疗法（interstitial photodynamic therapy,IPDT）对肺腺癌A549细胞裸鼠皮下异种移植模型的作用,为临床上应用IPDT治疗肺癌提供基础实验依据。方法离体培养肺腺癌A549细胞,收集细胞注射到24只裸鼠左背部靠近肩胛骨处皮下,并将其随机且平均分为四组:对照组、光敏剂组、激光组和IPDT组。对照组移植瘤注射生理盐水2 m
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目的探讨血卟啉衍生物作为光敏剂介导的间质光动力疗法（interstitial photodynamic therapy,IPDT）对肺腺癌A549细胞裸鼠皮下异种移植模型的作用,为临床上应用IPDT治疗肺癌提供基础实验依据。方法离体培养肺腺癌A549细胞,收集细胞注射到24只裸鼠左背部靠近肩胛骨处皮下,并将其随机且平均分为四组:对照组、光敏剂组、激光组和IPDT组。对照组移植瘤注射生理盐水2 m L/kg,给予自然光照射;光敏剂组移植瘤注射血卟啉衍生物10 mg/kg,避光处理4小时后,用自然光照射;激光组移植瘤注射生理盐水2 m L/kg后,通过注射器针头导入光纤给予波长为630 nm的激光间断照射15分钟;IPDT组移植瘤注射血卟啉衍生物10 mg/kg,避光处理4小时后,注射器针头导入光纤给予630nm激光间断照射15分钟。裸鼠每3天治疗1次,共给予3次治疗。每3天测量一次肿瘤的长、短直径,四组移植瘤样本在治疗完成14天后取出,并进行以下实验:（1）根据肿瘤的长、短直径计算肿瘤体积,绘制出肿瘤的生长曲线,并对四组肿瘤的体积变化进行对比,计算出肿瘤的生长抑制率（抑瘤率）。（2）采用HE染色法在光学显微镜下观察各组移植肿瘤细胞的病理学改变及细胞核、细胞质等细胞结构的形态学变化。（3）通过Tunel染色法检测不同组移植瘤细胞的凋亡情况,观察凋亡细胞的形态特征,并计算各组凋亡指数。（4）采用实时荧光定量聚合酶链反应（q RT-PCR）实验和蛋白免疫印迹（Western blot）实验分别评估肿瘤组织中一些凋亡相关基因Survivin、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的转录水平和蛋白质表达水平的变化。结果（1）三次治疗后,IPDT组的肿瘤体积明显小于对照组、光敏剂组和激光组,且有显著性差异（P＜0.05）。对照组、光敏剂组、激光组和IPDT组的抑瘤率分别为0、7.51%、9.43%和52.41%。（2）经HE染色后,IPDT组移植瘤组织出现较多变性、坏死的细胞,细胞排列紊乱,部分呈泡沫状;对照组、光敏剂组、激光组肿瘤细胞排列紧密,细胞核大深染。（3）Tunel染色显示,IPDT组有较多凋亡细胞,并有棕色的颗粒状物质存在于核细胞核中。对照组、光敏剂组、激光组和IPDT组的凋亡指数分别为3.2%、6.5%、8.7%和25.6%。（4）q RT-PCR结果表明,IPDT组的Survivin、Bcl-2因子的m RNA相对表达水平显著低于对照组、光敏剂组和激光组,而IPDT组Caspase-3、Caspase-9因子的m RNA相对表达水平显著升高,且差异均具有统计学意义（P＜0.05）。（5）Western blot实验结果显示,与其他三组相比,IPDT组Survivin、Bcl-2的蛋白相对表达水平显著下调,而Caspase-3、Caspase-9的蛋白相对表达水平显著上调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论IPDT能明显抑制肺腺癌移植瘤细胞的增殖及生长,可引起肺腺癌移植瘤细胞发生坏死及凋亡,对细胞具有不可逆转的损害作用,其促凋亡效应可能与下调Survivin、Bcl-2的基因表达及上调Caspase-3、Caspase-9的基因表达有关。
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