【摘 要】
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乙型肝炎病毒已成为危害人类健康的重要病原,可引起人类的急、慢性乙型肝炎,且与肝细胞癌的发生有着十分密切的关系,且目前尚缺乏行之有效的预防治疗措施.肝细胞的损伤主要由
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乙型肝炎病毒已成为危害人类健康的重要病原,可引起人类的急、慢性乙型肝炎,且与肝细胞癌的发生有着十分密切的关系,且目前尚缺乏行之有效的预防治疗措施.肝细胞的损伤主要由一系列免疫反应造成,乙肝表面抗原是引起反应的主要原因.然而现有的HBV转基因小鼠对HbsAg免疫耐受,为了能够观察HbsAg急性感染的免疫损伤,该论文主要在以下方面取得了一些结果:1.通过尾静脉大剂量液压裸质粒pcDNA3S于C57BL/6J与Balb/c品系小鼠上,小鼠血清中均出现HBsAg,便随后出现anti-HBsAg,以及相应的谷丙、谷草转氨酶的波动;免疫组织化学同样显示肝组织中存在HBsAg,与临床观察完全吻合.结果表明:通过此方法建立HBsAg感染是可行有效的;并且可以通过筛选而获得较理想的品系.2.在对质粒pcDNA3S进行改造的基础上,将改造后质粒pZ/EG-AS通过尾静脉大剂量液压至Cre转基因小鼠,并进行了相应的生化指标(如上)检测.结果表明:质粒pZ/EG-AS不存在基因渗漏现象,只有在Cre重组酶的参与下才能激活S基因表达.3.利用原核显微注射法建立了HbsAg转基因小鼠模型,经过PCR、Southern检测获得16只founder小鼠,转基因阳性率为17.4﹪(16/92),总体有效率为3.0﹪(16/525),与文献报道的效率相符合.其最大的优点在于S基因能够稳定地整合于小鼠基因组中,只有当引入了Cre重组酶时才能被激活而表达,从而避免了小鼠免疫系统发育过程中所致的免疫耐受.
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